Técnicas bacteriológicas

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Unidad 2. TÉCNICAS BACTERILÓGICAS.

2.1 Preparación de Medios de Cultivo.

Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos, razón por lacual es difícil aislarlas. A menudo nuestro interés es caracterizar una especie bacteriana, para lo cual debemos estar preparados para aislar, cultivar e identificar a la misma. Si bien el aislamiento es un paso crucial en estecamino, comenzaremos examinando los medios de cultivo, ya que en estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otroscomponentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias nutritivas que permitan el desarrollo yreproducción de microorganismos.

La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad de medios de cultivo también lo es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado.
Los requisitos que debe reunir elcultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan.

Las características de los microorganismos a tomar en consideración al momento de preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son:
− Tipo trófico: se refiere a los requerimientos de carbono y energía, según los cuales se los clasifica en autótrofos, heterótrofos,quimiotrofos (litótrofos u organotrofos) y fotótrofos.
− Tipo respiratorio: aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos y microaerófilos.
− Temperatura óptima de crecimiento: según el rango de temperatura al cual el
microorganismo presenta su mayor crecimiento, se los clasifica en psicrófilos, mesófilos y termófilos.
− Rango de pH: en general el rango óptimo de pH para la mayoría de las bacteriasoscila entre 6,6 y 7,2.

2.1.1 Características generales de un buen medio de cultivo.

Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos los nutrientes indispensables en la concentración adecuada, cantidad necesaria de sales y agua, que tenga la consistencia y el pH adecuados, que sea estéril y que no contenga sustancias inhibidoras.

Como ya se ha seña lado, la provisiónde elementos nutritivos en concentración adecuada, depende del conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hábitat natural.

La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo, se relaciona directamente con el pH, la fluidez y la presión osmótica que se le quiera brindar a los microorganismos.

Si se requiere sangre u otros componentes inestables, comoantibióticos y compuestos fácilmente oxidables al calor, cuando se requiera estos se esterilizaran por otro método y se agregaran al medio cuando se encuentre entre 45 a 50 ºC.

En cuanto a los inhibidores, cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor para algunos microorganismos y no para otros.


2.1.2 Constituyentes habituales de los medios de cultivo.

Los elementos citadosa continuación, son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de cultivo, aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación.

− Agua destilada o desionizada. Libre de inhibidores del crecimiento.
− Agar. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. El componente dominante en el agar es unpolisacárido, al que acompañan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. Existe en rama o en polvo, se solubiliza en agua a ebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse forma un gel inodoro e insípido (se gelifica alrededor de los 42°C), dependiendo de su grado de pureza, por lo que tiene la ventaja de ser sólido a la temperatura de incubación. Con la excepción de algunos...
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