Técnicas usadas en proteomica

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[técnicas más usadas en análisis de proteinas para identificacion, pronóstico de enfermedades] |

Resumen TEMA 1
Generalidades de la tecnología proteómica

 El proteoma celular es la totalidad de proteínas expresadas en una célula particular bajocondiciones de medioambiente y etapa de desarrollo, (o ciclo celular) específicas, como lo puede ser la exposición a estimulación hormonal. También se puede hablar del proteoma completo de un organismo que puede ser conceptualizado como las proteínas de todas las variedades de proteomas celulares. Es aproximadamente, el equivalente proteínico del genoma
Proteómica: Es el estudio del proteoma, estudiosque se han realizado tradicionalmente mediante la técnica de electroforésis en gel de dos dimensiones. En la primera dimensión las proteínas se separan por isoelectroenfoque, que separa las proteínas con base en su carga eléctrica. En la segunda dimensión, las proteínas se separan por peso molecular utilizando SDS-PAGE. El gel se tiñe con Azul de Coomassie o Nitrato de Plata para visualizar lasproteínas. Las manchas en el gel son las proteínas que han migrado a una localización específica y permite de esta forma identificarlas.

Proteómica es estudio a gran escala de las proteínas, en particular de su estructura y función. El estudio y comparación del proteoma en diferentes situaciones metabólicas y/o patológicas permite identificar las proteínas que en su presencia, ausencia oalteración se asocian con algún estadio fisiológico, por lo que es posible identificar proteínas que permitirían diagnosticar la enfermedad o pronosticar su evolución. Dichas proteínas se conocen con el nombre genérico de biomarcadores
La enorme complejidad del proteoma de la mayor parte de los organismos vivos obliga al empleo de diversas técnicas para separar las proteínas. Entre las técnicas máscomunes se encuentran la electroforesis mono y bidimensional así como la cromatografía líquida en sus distintas variantes.

ELECTROFORESIS
La electroforesis en gel es una técnica sencilla empleada de forma rutinaria en laboratorio para separar moléculas biológicas, especialmente ADN, ARN y proteínas según la movilidad de estas en un campo eléctrico, en función de su tamaño y de su cargaeléctrica. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación dependerá a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.
Los ácidos nucleicos, ADN y ARN,tienen por naturaleza carga negativa que los dirigirá al polo positivo, mientras que las proteínas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular de la proteína. Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional defibras cruzadas). por lo que las más pequeñas avanzarán mejor y más rápidamente y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida.
Los fragmentos del ADN extraído de una muestra biológica sobre un gel y un campo eléctrico, producirá la migración diferencial de los fragmentos a través de los poros de la matriz que puede observarse tiñendo el gel con bromuro de etilio, que es una sustanciafluorescente que se intercala en la molécula de ADN, y exponiéndolo con luz ultravioleta. El tamaño de los fragmentos de ADN se puede estimar comparándolos con el patrón de bandas que se obtiene de marcadores comerciales de peso molecular conocido. La electroforesis de ADN es útil se puede usar para comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo, para la identificación de ácidos...
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