Tacto

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

INTRODUCCION
Las enzimas o catalizadores biológicos amplifican la velocidad de muchas de las reacciones químicas que ocurrirían de otra forma con lentitud. Las enzimas no cambian el punto de equilibrio de las reacciones que promueven. No sufren ninguna modificación directa y permanente de su estructura durante la reacción química. El mecanismopor el cual actúan las enzimas es la disminución de la energía de activación de las reacciones de tal forma que aumenta el número de sustratos que se encuentran en un estado favorable para la reacción (estado de transición o de activación). Esta activación ocurre puesto que:
- Las enzimas se unen a las moléculas reactantes (sustratos) incrementando la concentración local.
- Colocan a lossustratos en una posición correcta.
- Aceptan o donan protones o electrones por acción de grupos de reacción que se encuentran a nivel de su sitio activo. Esto es lo que crea un estado de transición alterado disminuyendo la energía de activación.
Muchas de las reacciones que ocurren dentro de las células se realizan en diversos pasos que en una sola reacción rápida. La necesidad de una serie de pasospara una reacción está dada por la complejidad de las reacciones bioquímicas. De esa manera por ejemplo ocurrirían reacciones endergónicas que en un solo paso nunca podrían darse dentro de la célula por la lentitud causada si se produciría de manera espontánea. Muchas reacciones exergónicas liberan demasiada energía, la cual se podría expresar en calor intenso dañando el funcionamiento celular.Por esta razón, estas reacciones también ocurren a pequeños pasos de tal suerte que la energía sea liberada lentamente como para que se vuelva útil, sin perjudicar la integridad celular. Los pasos consecutivos que se dan en la célula y que pueden reemplazar una sola reacción química se denominan rutas metabólicas.
La actividad enzimática puede ser regulada, siendo activada o inactivada según losrequerimientos celulares en un momento dado. Esta actividad también está estrechamente controlada por factores ambientales dentro de la célula, tales como la temperatura y el pH. Las enzimas siempre exhiben una temperatura y un pH óptimo, características apropiadas para su funcionamiento. Por ejemplo, las enzimas en los tejidos de mamíferos siempre muestran temperaturas óptimas alrededor de los37°C, mientras que las de los peces del Ártico estarán cercanas a los 0°C. Muchas enzimas se denaturan a 45°C o más, pero en otros organismos (termofílicos), la actividad óptima se encuentra por encima de este límite.
2. PROCEDIMIENTO
Obtener la muestra de amilasa salival de la misma manera que se realizó en la Práctica anterior.
Experiencia N°1: Efecto del ion cloruro
Preparar la siguientebatería:

| BLANCO | NaCI 0% | NaCI 10% | NaCI 100% |
Buffer fosfato 0.1 M pH 6.9 | 1.5 mL | 1.5 mL | 1.5 mL | 1.5 mL |
NaCl 0,025 M. | --- | --- | 0.15 mL | 1.5 mL |
Almidón 1% | 0.5 mL | 0.5 mL | 0.5 mL | 0.5 mL |
Agua destilada | 11mL | 10.5 mL | 10.35 mL | 9 mL |
Preincubar por 5 minutos a 37°C |
Enzima | --- | 0.5 mL | 0.5 mL | 0.5 mL |

Incubar por otros 5 minutos a 37°C.Agregar 0.1 mL de Solución de Yodo, dejar reposar por 5 minutos y luego medir la Absorbancia a 660 nm en el espectrofotómetro. Graficar actividad enzimática versus concentración del ion Cloruro.
Experiencia N° 2: Efecto de la temperatura
Preparar la siguiente Batería:

| BLANCO | Tubo 0ºC | Tubo 20ºC | Tubo 37°C | Tubo 50°C | Tubo 100°C |
Buffer fosfato 0.1 M pH 6.9 | 1.5 mL | 1.5 mL | 1.5 mL| 1.5 mL | 1.5 mL | 1.5 mL |
NaCI 0.025 M | 1.5 mL | 1.5 mL | 1.5 mL | 1.5 mL | 1.5 mL | 1.5 mL |
Almidón1% | 0.5 mL | 0.5 mL | 0.5 mL | 0.5 mL | 0.5 mL | 0.5 mL |
Agua destilada | 10.5 mL | 10 mL | 10 mL | 10 mL | 10 mL | 10 mL |

Preincubar por 5 minutos a las diferentes temperaturas establecidas para cada tubo y luego agregar 0.5 mL del preparado enzimático (excepto al tubo Blanco)....