Tareas

PRACTICA No. 16
MEDIO DE CULTIVO PARA EL AISLAMIENTO EIDENTIFICACION DE ENTAMOEBA HISTOLYTICA

OBJETIVOS
1. Aprender a realizar el medio de cultivo LES (suero de huevo de Locke ) de Boeck y Drbohlav.
2. Observar las formas morfológicas de E. histolytica en el cultivo.

INTRODUCCION
Entamoeba histolytica es un protozoo parásito anaerobio con forma ameboide, como su nombre lo indica, dentrodel género Entamoeba. Es patógena para el humano y para los cánidos, causando amebiasis incluyendo colitis amébica y absceso hepático.
se pueden distinguir varias formas o fases de desarrollo en esta especie, presentes durante varias etapas de su ciclo de vida: Trofozoíto: es la forma activamente móvil de la especie. Se caracteriza por tener un núcleo con una concentración de cromatinapuntiforme y generalmente concéntrica llamado cariosomacentral; así como la formación de cromatina en la periferia del núcleo. Quiste: Contiene de 1 a 4 núcleos, dependiendo de la madurez del quiste. Son de forma redondeada, refringente con una membrana claramente demarcada.
Los métodos de cultivo en la actualidad pueden ser divididos en axenicos, monoxenicos y plurixenicos. Esta división esta hecha enfunción de la ausencia o presencia y número de bacterias entéricas. Por ejemplo: axenicos son libres de bacterias, ya que sirve para la investigación o poara la obtención de antígeno amebiano.
En 1924 Boeck y Drbohlav lograron cultivas con éxito E. histolytica en un medio artificial con base en huevo, que contenía la flora microbiana de las materias fecales.
Los medios de cultivo son de granayuda para realizar un diagnostico completo en las protozoos humanas aunque en la mayoría de los laboratorios de Parasitología no se utilizan.
MUESTRA BIOLOGICA
Muestra de materia fecal
MATERIAL
 matraz Erlenmeyer
 1 matraz aforado de 1000 ml
 2 tubos de ensayo
 2 vasos de precipitados
 1 pipeta Pasteur con bulbo
 3 aplicadores
 4 huevos
 5 perlas de vidrio

REACTIVOS

Alcohol
 Agua destilada
 Cloruro de sodio NaCl
 Cloruro de potasio KCl
 Cloruro de calcio anhidro
 Cloruro de magnesio MgCl2
 Bicarbonato de sodio
 Dextrosa
 Suero humano estéril


PROCEDIMIENTO PARA PREPARAR LA SOLUCION DE LOCKE

1) Se disuelven en 500 ml de agua destilada
 .9 g de cloruro de sodio
 O.4 d de cloruro de potasio
 0.2 de cloruro de anhidro
2)Se disuelven 0.2 g de bicarbonato de sodio
3) Se mezclan las dos soluciones
 se agregan 2.4 g de dextrosa
 se vacía la mezcla a un matraz aforado de 100ml y se afora hasta la marca.


1. Preparación de la fase sólida con huevo.
Se lavan cuatro huevos, se esteriliza la superficie de huevos frescos de gallina con alcohol, se rompen y enseguida se rompe y se vacíen en un matraz conperlas de vidrio estéril.
Se añaden 12.5 ml de sol. de Locke por cada 45 ml de huevo. Se emulsifica y se filtra a través de una gasa, utilizando vacío hasta eliminar todas las burbujas de aire. Se adicionan cantidades de 5 ml de huevo emulsificado a tubos de cultivo de 16 x 125 mm con tapón de rosca
aflojado, y se autoclavean a 100°C durante 10 min., colocando los tubosinclinados en un ángulo de 35° que produzca 12 a 15 mm de huevo en el fondo del tubo. El medio inclinado resultante debe quedar libre de burbujas. Se enfrían a temperatura ambiente y el huevo solidificado se cubre con 6 ml de solución de Locke.
PROCESO DE ESTERILIZACION
Se esteriliza a 121°C durante 15 min a una presión de 15 lb/in. Se prepara el sobrenadante con una mezcla de 8 partes desolución de Locke estéril con una parte de suero humano esteril e inactivo a 56°c durante 30 min.

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2. Después de enfriar los medios inclinados a temperatura ambiente, se aprietan los tapones y se pueden refrigerar hasta seis meses.
Inoculación de los medios.
Las muestras de heces se emulsifican en solución salina fisiológica y se filtran por una gasa para eliminar las partículas...