Tecnicas de biotecnologia

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2/9/2009

13.1 Purificación y detección de ácidos nucleicos Técnicas de biotecnología utilizando ácidos nucleicos
Capítulo 13 Biochemistry 6th Edition Campbell and Farrell


Técnicas deseparación


Electroforesis Auto radiografía: se usa para visualizar la imagen que ha sido expuesta a oligonucleotidos marcados. Luminiscencia: depende de la emisión de luz. Fluorescencia: emisión adiferentes largos de onda.



Métodos de detección


 

13.2 Uso de enzimas de restricción


Son enzimas que hidrolizan el enlace fosfodiester en puntos específicos.


Nucleasas
Endonucleasas de restricción



Producen pedazos de DNA que son manejables.

Endonucleasas de restricción


Las secuencias reconocidas leen lo mismo en ambas direcciones.
Palindromes


“Sticky ends”: secuencias pequeñas en los extremos del DNA; proveen puntos donde otras moléculas de DNA se enlazan.

1

2/9/2009

13.3 Clonación


DNA recombinado (Chimeric DNA):moléculas de DNA que contienen segmentos enlazados covalentemente de otras fuentes de DNA.
 

Utiliza los “sticky ends” Se producen copias idénticas de DNA.


Clones: población idéntica deorganismos, células, virus o moléculas de DNA.

Clonación de un virus

Producción de DNA recombinado

Cada virus infecta una célula y se reproduce, igual que su progenie. Finalmente aparece unaplaca que indica el área donde las células fueron matadas. Representa la progenie clonada.

Clonación de las células
Ambos DNA se tratan con la misma enzima, se mezclan y se permite que se unan los“sticky ends”. Se produce DNA recombinado. Se incorpora en un virus y son sembrados. Se identifican los segmentos clonados: foreign DNA, insert, geneX o YFG (your favorite gene)

2

2/9/2009Plásmido

Experimentos exitosos


Transformación: DNA es incorporado en el huésped.


Las bacterias incorporan el plásmido son transformadas.


Aumento en temperatura (heat-shock) o por...
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