Tecnicas de siembra, aislamiento e inoculación.

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tECNICAS DE SIEMBRA, AISLAMIENTO E INOCULACIÓN.



1. NORMAS GENERALES DE TRABAJO
2. MANIPULACION DE MATERIAL
3. MANIPULACION DE MUESTRAS
4. TÉCNICAS DE SIEMBRA
5. INCUBACIÓN. CONCEPTO Y PARÁMETROS FUNDAMENTALES.
6. METABOLISMO MICROBIANO.
7. CRECIMIENTO MICROBIANO.


1. NORMAS GENERALES DE TRABAJO

Además de las reglas de seguridad ya vistas, se seguirá lassiguientes normas:
1. Todo el material empleado en el manejo de microorganismos deberá ser estéril.
2. Todas las manipulaciones deberán realizarse en un radio de 10-15 cm (zona aséptica), alrededor de la llama del mechero, o bien en una cámara de flujo laminar.
3. Se procurará disponer de todo el material para el procesamiento de una muestra al alcance de la mano, para evitar desplazamientosinnecesarios y el abandono de la misma.
4. Es necesario adquirir rapidez y automatismo, indispensable para una buena ejecución de las técnicas.

2. MANIPULACION DE MATERIAL

2-1 ASA E HILO DE PLATINO O NICRON
Deben esterilizarse antes y después de su uso, para lo cual, se coloca a la llama del mechero, flameándolas hasta alcancen el rojo vivo en toda su longitud. Cuando se quiera introducir losen recipientes de cuello estrecho (tubos, matraces, frascos, etc.), se debe flamear también la parte del mango que quede dentro del recipiente durante la manipulación.
Tras la esterilización, se deben dejar enfriar unos segundos en la zona aséptica, pues si contactan inmediatamente con una fuente de microorganismos (colonias, medios líquidos, etc.), esterilizarían la muestra recogida.

2-2PIPETAS
Se utilizarán prepipetas, o meno adecuado, pipetas de seguridad (con filtro de algodón en su boquilla). Se flameará previamente la punta y en toda la longitud que contacte con el recipiente de la muestra.
La pipeta se manejará siempre con la punta dirigida hacia abajo, manteniéndola vertical u oblicuamente, pero nunca horizontalmente.


2-3 RECIPIENTES DE VIDRIO
Siempre que contenganalgún producto en su interior (medio de cultivo, suspensión de microorganismos, etc.), deben estar tapados con una torunda de algodón o con su tapón.
Se manipularán del siguiente modo:
• No se abrirán en posición vertical, se realizará oblicuamente, dirigiendo su abertura hacia la llama
• El algodón (o tapón hermético) se coge con el dedo meñique de la mano opuesta a la que sostiene elrecipiente), evitando todo contacto mientras se manipule el contenido del mismo, el cual, se mantendrá en la posición descrita en el punto anterior.
• La boca se flameará después de retirar el cierre y antes de volver a reponerlo, para lo cual se expone a la llama unos segundos mediante un movimiento de rotación.

2-4 PLACAS DE PETRI
Deben manipularse semiabiertas y con la aberturaorientada hacia la llama del mechero
Cuando la técnica no permita la manipulación anterior, se manejará con la superficie de la placa orientada de forma oblicua hacia la llama del mechero, dentro de la zona aséptica. La tapa de la placa queda depositada sobre la mesa de trabajo, pero siempre orientada hacia abajo (depende de la zona estéril).


3. MANIPULACION DE MUESTRAS

TOMA DE MUESTRAS DECULTIVOS

3.1. Medio líquido

3.1.1.1 CON ASA DE PLATINO O NICRON.
Se seguirán las siguientes etapas
1. Destapar el tubo.
2. Flamear la boca del mismo.
3 .Introducir el asa estéril y sumergirla en el medio.
4 .Extraer el asa, la muestra queda formando una película circular en la luz de la misma. Sólo se puede conocer el volumen de muestra tomado, utilizando asas calibradas.
5. Se flamea denuevo la boca del tubo y se tapa.

3.1.1.2. CON PIPETA ESTÉRIL

Del mismo modo que el anterior, teniendo en cuenta las condiciones previas de manipulación aséptica de las pipetas; la muestra se toma por aspiración.

3.2. Medio sólido

Consta de los siguientes pasos:

1. Destapar el tubo y flamear o semi-abrir la placa.
2. Contactar suavemente con el asa o hilo estéril alguna colonia...
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