Tecnicas histologicas

Técnicas Histológicas: Microscopía Electrónica e Inmunocitoquímica PROGRAMA TEORICO Microscopía electrónica 1. Microscopía electrónica de transmisión. Resolución y contraste. 2. Células:ultraestructura. 3. Fijación 4. Inclusión y ultramicrotomía. Contraste positivo en cortes 5. Microscopía electrónica de alto voltaje 6. Artefactos del procesamiento ultraestructural 7. Procesamientos a bajastemperaturas 8. Contraste negativo 9. Sombreado metálico. Réplicas 10. Criofractura 11. Autorradiografia 12. Métodos citoquímicos generales 13. Citoquímica de enzimas 14. Inmunocitoquímica 15. Citoquímicade lectinas 16. Microscopía electrónica de barrido Inmunocitoquímica 1. Introducción a las técnicas inmunocitoquímicas. Definición. Condiciones necesarias para su realización 2. Aspectos generales delos anticuerpos y de la interacción antígeno-anticuerpo. Anticuerpos policlonales y monoclonales: ventajas e inconvenientes de su utilización 3. Procesamiento de los tejidos previo a la realizaciónde técnicas inmunocitoquímicas: Fijación. Inclusión. Corte. Posibles pretratamientos 4. Métodos de detección inmunocitoquímica: Métodos directos e indirectos. Inmunofluorescencia. Métodosinmunoenzimáticos: con peroxidasa, con fosfatasa alcalina. Métodos con avidina-biotina. Métodos con oro coloidal. Métodos de tinción múltiple 5. Especificidad de las técnicas inmunocitoquímicas: Definición deespecificidad. Factores que pueden producir tinción inespecífica. Métodos para comprobar la especificidad: Controles positivos y negativos PROGRAMA DE PRÁCTICAS: Realización de 3 métodosinmunocitoquímicos: A. Método de los complejos peroxidasa-anti-peroxidasa (PAP) y método Envision sobre cortes de material incluido en parafina. Control de absorción. B. Técnica de doble inmunotinción: Método de loscomplejos fosfatasa alcalinaanti-fosfatasa alcalina (APAAP) y de los complejos avidina-biotina (ABC) sobre cortes de material incluido en parafina. C. Método de las inmunoglobulinas conjugadas con...