Tejido conectivo

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REVISTA DE ODONTOLOGÍA 
 
Resultados
Elaboración de tejido conectivo
artificial de la mucosa oral humana
 
Estandarización del método de aislamiento y cultivo de los fibroblastos. El tiempo A los datos obtenidos se les aplicó el Análisis de Sobrevida de Kaplan-Meier (60). Al realizar la prueba de Wilcoxon para igualdad de funciones de sobrevida con nivel de significancia 0.05, se encontróque el valor P fue de 0.52 (P>0.05); por tanto, el pretratamiento con las enzimas colagenasa o tripsina no afectó el tiempo (mediana = 26 días) de formación de monocapas confluentes (Ver Figura 1).
Figura 1. Curvas de estimación de sobrevida de kaplan-Meier para la variable tiempo de formación de monocapas confluentes. Las diferencias en la mediana del tiempo empleado por las células paraconfluir no fueron significantes (P>0.05) por la prueba de Wilcoxon.
Los grupos de tratamiento fueron: círculos abiertos (explantes digeridos parcialmente con colagenasa), X (explantes no digeridos), cuadros rellenos (explantes parcialmente digeridos con tripsina/EDTA)
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Estudio del efecto de las variables concentración
celular del inóculo y agitación postsiembra
en el cultivo defibroblastos sobre
mallas de colágeno. Resultados previos de nuestro Laboratorio, mostraron que la siembra de fibroblastos permite la formación de tejido conectivo artificial sobre la superficie y entre las fibras de colágeno de los soportes (37). Desafortunadamente el tejido obtenido en ese entonces, exhibió disposición nodular que no permitió a los fibroblastos cubrir completamente las mallas;consecuentemente, el tejido no se formó sobre toda la estructura.
Para mejorar la distribución y el crecimiento, en este trabajo se decidió evaluar la influencia de dos parámetros: concentración celular de siembra (1.56 X 105 o 3.12 X 105 células / cm2) y agitación postsiembra durante tres horas. A las dos y cuatro semanas de incubación, los cultivos sometidos a agitación constante postsiembra, mostraronun mayor número de células por campo y una distribución más regular, no focalizada, de las mismas en la malla en comparación con los que fueron incubados sin agitación. Los efectos descritos fueron más evidentes en los cultivos sembrados con alta densidad celular (3.12 X 105 células / cm2) que en los que se empleó baja densidad celular de siembra (1.56 X 105 células / cm2).
Los resultadosobtenidos luego de dos (paneles A-D) y cuatro (paneles E-H) semanas de incubación se presentan en la Figura 2. A las dos semanas los cultivos sometidos a agitación (paneles B y D) mostraron más células por campo y distribución celular más regular que aquellos que no fueron agitados post-siembra (paneles A y C). Estos efectos fueron más evidentes en los cultivos sembrados con alta densidad (panel D) que enaquellos sembrados a baja densidad (panel B). Después de cuatro semanas los cultivos se comportaron de forma similar: los paneles E y G son cortes de cultivos no sometidos a agitación sembrados a baja (E) y alta (G) densidad. Los paneles F y H, muestran cultivos sometidos a agitación, sembrados a baja y alta densidad respectivamente.
Figura 2. Apariencia microscópica de mallas de colágeno tipo Icultivadas con fibroblastos orales. Se presentan los resultados obtenidos luego de dos (paneles A-D) y cuatro (paneles E-H) semanas de incubación. Los paneles (A) y (E) muestran cultivos sembrados con baja densidad celular (1.56 X 105 células /cm2) y sin agitación. Los paneles (B) y (F) corresponden a cultivos sembrados con baja densidad celular y agitación por tres horas. Los paneles (C) y (G)muestran cultivos sembrados con alta densidad celular (3.12 X 105 células /cm2) y sin agitación. Los paneles (D) y (H) son cultivos sembrados con alta densidad celular y con agitación por tres horas. Las flechas en la figura señalan el crecimiento nodular restringido a una superficie de la malla en los soportes incubados sin agitación.
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