Thiobacillus

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIANA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA MICROBIANA

OXIDACIÓN DE AZUFRE Y DE IÓN FERROSO POR BACTERIAS QUIMIOLITOTRÓFICAS

GRUPO
5IV1

SECCION
1

FECHE DE ENTREGA

08/NOV/2011

PROFESOR
CANSECO

OBJETIVOS:

Comprobar que Thiobacillus thiooxidans utiliza azufre como donador deelectrones, así mismo, Thiobacillus thioparus utiliza S2O3 para su crecimiento y Thiobacillus ferrooxidans oxida al Fe2+.


FUNDAMENTOS:

ACIDEZ TITULABLE (Formación de Ácido Sulfúrico por actividad bacteriana)
Método: valoración ácido-base (reacción de neutralización), se basa en la titulación del ácido presente en la muestra, utilizando una solución valorada de NaOH hasta alcanzar elequilibrio químico de la reacción. El punto final de la neutralización estequiométrica se pone de manifiesto con el cambio en la coloración de fenolftaleína. A un pH, lo mas cercano posible al punto de equivalencia.
Na2SO4 + 2H2O
Na2SO4 + 2H2O

2NaOH + H2SO4

Determinación de Azufre de Sulfatos
La formación de sulfato de Bario insoluble es una prueba común en la determinación del ionsulfato. La determinación consiste en la formación del precipitado de sulfato de Bario mediante la siguiente reacción:
BaSO4 + 2Cl
BaSO4 + 2Cl

Ion Sulfato + BaCl2

El precipitado es insoluble en la presencia de HCl, lo que favorece la separación del ion sulfato si en la muestra encontramos carbonatos, fosfatos, cromatos o análogos.

Tiosulfato Residual (Yodimetría Método directo)Este método utiliza como agente oxidante una solución valorada de Yodo, pudiéndose entonces el ion Tiosulfato presente en la muestra mediante le siguiente reacción:
2I- + S4O6
2I- + S4O6

I2 + S2O3

El punto final de la reacción se detecta utilizando solución acuosa de almidón (-amilosa), la cadena helicoidal de -amilosa absorbe el yodo presente en la solución formada y da unacoloración azul intenso.

Determinación de ion ferroso (Permanganimetría). Método de Zimmermann-Reinhardt.

Requisitos
La titulación debe llevarse a cabo por triplicado, para evitar la oxidación del ion ferroso en condiciones atmosféricas, la titilación con permanganato de potasio debe ser lenta y seguida de una agitación intensa
H2SO4=(acondicionamiento del medio) produce la reducción de Mn7+ aMn2+, la cantidad debe ser tal que evita la reducción parcial de MnO4 a MnO2, o bien haya incertidumbre en el punto final.
H3PO4= forma un complejo con el ion Fe3+ que permite la detección del punto final. Al eliminar el ion Fe3+ aumenta el poder reductor del Fe2+ coadyuvando a su oxidación total por acción del permanganato.
MnO4= bloquea el poder de oxidación del hierro sobre el cloro.Reacción de titulación:
Mn2+ + 5Fe3+ + 4H2O
Mn2+ + 5Fe3+ + 4H2O

5Fe2+ + MnO4 + 8 H+


REGISTRO DE DATOS:
a) Curva tipo de azufre:

Tubo No. | g de SO4 | Absorbencia |
| | 445nm |
1 | 0 | 0 |
2 | 24 | 0.022 |
3 | 72 | 0.111 |
4 | 120 | 0.161 |
5 | 168 | 0.210 |
6 | 192 | 0.226 |
7 | 216 | 0.260 |
8 | 240 | 0.272 |

Registre en el siguiente cuadro los datosexperimentales obtenidos que correspondan a los medios de cultivo y a los microorganismos empleados.

Microorganismos cultivados | Cultivos |
| Agitados | Estacionarios |
| Con inoculo | Sin inoculo | Con inoculo | Sin inoculo |
Thiobacillus thiooxidans | Medio cultivo A |
1.-Azufre residual |
a)mg papel | 0.8323 | 0.8479 | 0.8487 | 0.8491 |
b)mg papel+muestra | 1.2331 | 1.3501| 1.3723 | 1.3501 |
2.- Ácidez titulable |
| | | | |
a) Volumen total | 43 ml | 41 ml | 47 ml | 41 ml |
b)Gasto de NaOH/alícuota(mL) | 3.3 ml | 1.3 ml | 4.1 ml | 1.2 ml |
3.- Azufre de Sulfato formado |
a)Alícuota para determinación en mL. | 1:10- 0.2ml | 1ml | 1:10- 0.2ml | SN |
b)Absorbencia obtenida | 0.152 | 0.001 | 0.012 | 0 |
4.- pH | 2.01 | 4.92 | 2.39 | 4.82 |...
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