Tincion De Esporas

Tinción de esporas
Principio de la coloración
Es una tinción estructural. Especies de los géneros bacillus y Clostridium producen estructuras llamadas endoesporas. A diferencia de la célulavegetativa que le da origen, las esporas son estructuras muy resistentes al calor, a la desecación y a los agentes químicos. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento denutrientes, temperaturas extremas, etc) formándose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporo génesis, la célula vegetativa libera la espora al exterior. Cuando el ambientees favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. Las esporas tienen varias capaz, por eso son muy difíciles de teñir. La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:* Verde malaquita: capaz de teñir esporas en caliente
* Safranina: colorante de contraste que tiñe las células vegetativas
La coloración requiere calentamiento para que el colorante atraviesela pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de lasbacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo cual también facilita su entrada a las bacterias.
Técnica:
1. Preparar frotis bacterianos de :Bacillus subtilis, Bacillus sphaericus, Bacillus thuringiensis
2. Teñir con verde malaquita. Colocar un trozo de papel de filtro encima de la muestra y añadir colorante hasta empapar el papel defiltro.
3. Colocar la muestra sobre el meche 5 min
4. Lavar con agua el exceso de colorante
5. Teñir con safranina 1min
6. Lavar con agua el exceso de colorante
7. Secar lapreparación
8. Observación al microscopio

Observaciones
* Los Bacillus sphaericus posee una endoespora esférica con localización terminal y deformante de la celula vegetativa.
* Los Bacillus...