Tincion de gram

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10 de agosto de 2010

TINCION DE GRAM
Es un procedimiento que sirve para identificar muchas especies bacterianas por las propiedades colorantes de la pared. A la especie desconocida se le aplicaun colorante púrpura, después yodo, luego un baño de alcohol y al final una contratinción. La pared celular de la gran-positiva permanece de color púrpura. La pared de una especie gran-negativapierde su color al inicio, pero la contratinción lo vuelve rosa.


Los cocos y los bastoncillos frotados obre portaobjetos se tiñeron con un colorante rojo. Después se lavaron y se tiñeron con yodo.Todas las paredes de la célula adquirieron un color púrpura. Después el portaobjetos se lavo con alcohol, lo que quito la tinción de las células gran-negativas haciéndolas incoloras. Enseguida elportaobjetos se tiñió de nuevo (con azafrina) se lavo y se seco. Las células gran-positivas mantuvieron un color purpura pero la tinción de contaste coloreo las células gran-negativas que adquirieron uncolor rosa claro.
Objetivos
* Recoger muestras.
* Hacer el extendido en espiral.
* Dejar secar a temperatura ambiente.
* Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor(flameado 3 veces aprox.)
* Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de color azul-purpura.
*Enjuagar con agua.
* Agregar lugol y esperar entre 30 segundos y 3 minutos.
* Enjuagar con agua.
* Agregar acetona y/o alcohol y esperar entre 15 y 20s.
* Enjuagar con agua.
*Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
* Enjuagar con agua.
* Para observar almicroscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
Explicación: El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como...
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