Tincion De Gram

Tinción de Gram
Introducción.
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Es usada para clasificar a las bacterias sobre la base de sus formas, tamaños, morfologías celulares yreacción de Gram. A nivel de laboratorio es útil como test para un rápido diagnostico presuntivo de agentes infecciosos, tanto en muestras como en cultivos de crecimiento, y adicionalmente sirve para valorar la calidad de la muestra clínica. Las bacterias se tiñen de Gram (+), Gram (-) o no se tiñen debido a sus diferencias en la composición de su pared y arquitectura celular.
Las bacterias Gram (+)tienen una gruesa capa de peptidoglucanos y gran cantidad de ácidos teicoicos que no son afectados por la decoloración con alcohol y/o cetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con yodo y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared está intacta o dañada (por tratamientos antibióticos, edad celular)
Las bacteriasGram (-) tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucanos ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacaridos. Esta membrana externa es dañada por alcohol y/o acetona de la decoloración, permitiendo que el primer colorante acomplejado con yodo escape y sea reemplazado por el contracolorante. Considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de colormoradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo.
Bacteria Gram (+)
Bacteria Gram Positiva |
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Tiene una capa gruesa de peptidoglicano (mureina) y dos clases de ácidos teicoicos. Ácido Lipoteicoico que está en la superficie, empotrado en la capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplásmica. Y ácido teicoico de la pared que está en la superficie y se unesólo a la capa de peptidoglicano. El ácido Teicoico es el responsable del determinante antigénico del organismo. |

Bacteria Gram (-)
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| Tiene una capa delgada de peptidoglicano (mureina) unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. En el lipopolisacárido, la porción de lípido está embebida en elfosfolípido y el antígeno O polisacárido está en la superficie. El lípido se llama Lípido A y es tóxico, pero el lipopolisacárido entero se llama Endotoxina. La pared de la célula tiene poros llamado Porines para el transporte de substancias de peso molecular bajo. Entre la membrana citoplásmica y la pared celular hay un espacio periplásmico con enzimas hidrolíticas, enzimas inactivadoras de antibióticosy proteínas de transporte. |

Técnica de la coloración Gram
Fijar un frotis
Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco.
Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra.
Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositarla muestra contenida en el asa.
Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina.
Esperar que seque al aire libre o ayudarse con lallama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.
Tinción
Con violeta cristal, violeta de...