Tincion de gram

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Elaboración de la columna de
Winogradsky

Objetivo: Llevar a cabo los procedimientos necesarios para realizar un cultivo bacteriano mediante la columna de Widnogradsky, así mismo su observación durante seis semanas.

Introducción: La columna se enfoca sobre todo al ciclo del azufre, pero se podría desarrollar igualmente la reproducción de otros ciclos biogeoquímicos equivalentes paranitrógeno, carbono y otros elementos. El montaje consta de un cilindro ancho de cristal que se llena con lodos ricos en materia orgánica hasta 1/3 de su volumen. Se añaden restos orgánicos de diferente origen (tiras de papel de periódico, aserrín, restos de raíces de plantas, carne piada, etc.) Se añade a la mezcla un suplemento compuesto de SO4Ca y CO3Ca (que actúan como fuente de sulfato y tampónrespectivamente). La mezcla, bien apretada para que no queden burbujas de aire, se cubre con agua procedente de un lago, estanque, acequia (o alguna fuente similar), se cubre con papel de aluminio y se deja en una ventana donde reciba la luz del sol.
A lo largo de la columna se desarrollan diversos organismos:
En la zona inferior de lodos se desarrollan organismos que desarrollan procesosfermentativos que producen alcohol y ácidos grasos como subproductos de su metabolismo. Estos productos de "desecho" son a su vez el sustrato para el desarrollo de bacterias reductoras de sulfato. Como resultado se liberan sulfuros que difunden a la zona superior oxigenada creando un gradiente en el que se desarrollan bacterias fotosintéticas que utilizan el azufre.
Por encima de esta zona puedendesarrollarse las bacterias púrpura que no utilizan el azufre.
Cianobacterias y algas crecen en la parte superior y liberan oxígeno que mantiene aerobia esta zona.
Material:
• Lodo
• Periódico
• Raíces de plantas
• Aserrín
• Germen de soya
• Agua destilada
• Probeta
• Espátula
• Recipiente




Procedimiento:
En el recipiente mezclar todos loscomponentes, introducir una parte del lodo, luego un poco de aserrín, periódico, raíces y un poco de agua, con ayuda de la espátula mezclar muy bien hasta obtener una mezcla homogénea.
Continuar así de esta manera, mezclando cada uno de los componentes poco a poco y así sucesivamente hasta llenar la probeta a un aproximado del 80% de su capacidad.
Después cortar el germen en trozos muy pequeñosy agregar a la mezcla. Tapar la probeta con papel aluminio.















Actividades:
• Anotar observaciones de modificaciones en cuanto a color, olor, desarrollo de microorganismos y otros.
• Con una pipeta tapada en su extremo superior, introducirla hasta el fondo y dejar que llegue el líquido por sí solo.
• Depositar una gota en el portaobjeto y observar almicroscopio con el objetivo de 40x y 100x.
• Teñir con un colorante por desplazamiento y volver a observar y hacer anotaciones.
• Tomar una muestra de la parte media y repetir los pasos.















Primera semana:
En la parte del lodo se hicieron pequeños huecos, se infiere que de aire, en la parte de arriba había un poco de agua turbia y con una capa en donde seobservaba un poco de espuma, el olor que se percibía era desagradable, como a descompuesto.










Observación de la muestra tomada del fondo de la columna: Se lograron apreciar puntos de color negro. El colorante que utilizamos fue azul de metileno, así observamos unos microorganismos en movimiento.

Observación de la muestra tomada de la parte media de la columna: La muestra que comoya se indicó fue tomada de la parte media de la columna, le agregamos como colorante verde de malaquita y se observaron como unos microorganismos de forma alargada.

Observación de la muestra tomada de la parte superior de la columna: El colorante utilizado en la observación de esta muestra fue el yodo-lugol así logramos observar microorganismos de forma alargada, sólo que en mayor cantidad....
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