TINCION DE GRAM
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.
Debesu nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar unaprimera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa,rojo o grosella
METODOLOGIA
Recoger muestras.
Hacer el extendido con un palillo de madera.
Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
Fijar la muestra con metanoldurante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente).
Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto. Todas las células gram positivas se tiñen de colorazul-púrpura.
Enjuagar con agua.
Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
Enjuagar con agua.
Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del reactivo(parte crítica de la coloración).
Enjuagar con agua.
Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.PASOS DE LA TINCION
PASOI
Echar una gota de agua al porta objeto
PASOII
Colocar en el portaobjeto la bacteria
PASO III
Preparar el frotis bacteriano , hacer calentar el portaobjetoPASOIV
Teñir con cristal violeta 1 minuto
PASO V
Lavar con abundante agua el exceso de colorante
PASO VI
Cubrir con lugol 1 min
PASOVII
Lavar con agua el exceso de LugolPASOVII
Decolorar con alcohol-acetona aproximadamente 30 seg
PASO IX
Lavar con abundante agua para eliminar el resto de decolorante.
Teñir con Safranina 1 min
PASOX
Lavar con abundante...
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