Tincion de ziehl

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Tinción de Ziehl Neelsen
La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, para la identificación de microorganismos patógenos, por ejemplo M. tuberculosis.
Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl, un bacteriólogo yFriedrich Neelsen, un patólogo.
Esta técnica puede realizarse tanto en muestras histológicas como citológicas.Variante histológica
Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina.Los reactivos necesarios para su realización son los siguientes:
ácido periódico 58%
1. carbol fucsina de Ziehl (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden dado:
0,5 g fucsina básica
1. 50 cc agua destilada
2. 5 cc etanol absoluto
1.
1. 28,5 g cristales de fenolderretidos
2. hematoxilina
3. alcohol ácido 1%:
2. alcohol de 35º
3. ácido clorhídrico
El procedimiento es el siguiente:
1. desparafinar e hidratar los cortes
2. ácido periódico 5%, 10 min
3. lavar con agua destilada
4. fucsina fenicada, 15 min
5. decolorar en alcohol ácido al 50%
6. lavar con agua destilada
7. hematoxilina, 10 min
8. azulidificarcon, por ejemplo, carbonato de litio
9. deshidratar, aclarar y montar preparacione
10. Resultados
BAAR: rojo.
Núcleos: azul semiamarillo.
Variante clásica o "en caliente"
Ésta y la siguiente variantes son para preparaciones citológicas.
1. Hacer un frotis de la muestra.
1. La fijación al calor asegurará de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgadopuede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tinción.
2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tinción con los extendidos hacia arriba. Nunca tiña más de 12 portaobjetos a la vez.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tinción.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
3. Deje que el colorantepermanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este período.
4. Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos).
4. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tiña la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el colorante.
5. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con aguacorriente fría hasta que toda la tinción libre quede lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5. Decolorar con alcohol-ácido.
6. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante, tal como alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos durante 7 minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no sonbacilos TBC puede permanecer teñido. Enjuague con agua una vez más los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos aún están rosa, aplique una cantidad adicional de la solución decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
7. Aplique la solución de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
7. Enjuagar con agua
8. Vuelva a enjuagarcon un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.
8. Ahora coloquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y haga la observación al microscopio con 100 x 100
o en "frío"
1. Hacer un frotis.
2. Dejarlo en el puente de tinción.
3. Aplicar fucsina-fenicada (solución confenol y mayor concentración de fucsina).
4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
5. Decolorar con alcohol acido.
6. Lavar con agua del grifo.
7. Contrastar con azul de metileno

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