Tinciones

COLORACIONES4.1. O
BJETIVOS
 
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Interpretar el fundamento de las coloraciones en la práctica microbiológica.
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Ejercitar las técnicas de coloración simple y compuesta.
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Practicar la preparación de coloraciones de uso a partir de soluciones madre.
4.2. I
NTRODUCCIÓN
 
En general, las bacterias y otros microorganismos son transparentes, lo que dificulta suestudio cuando losexámenes se realizan en fresco. Por eso para distinguirlos del medio esnecesario hacer una coloración (tinciones simples), las cuales también sirven para contrastar o realzar distintas características morfológicas o estructurales (tinciones diferenciales).La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidadespecífica por algún componente celular. Existen varios tipos decolorantes, pero los másusados en microbiología son: las sales colorantes y los colorantes liposolubles
a) Sales colorantes:
Los colorantes más comúnmente usados son sales que pueden ser de tipo ácido o básico,términos que no indican necesariamente su pH en solución, sino que una parte significativade la molécula sea aniónica o catiónica.Los colorantes básicos consisten en un catión coloreadounido a un anión incoloro.Ej: clorhidrato (-) de azul de metileno (+).Los colorantes ácidos tienen el catión incoloro unido a un anión coloreado.Ej: eosinato (-) de sodio (+).Los colorantes se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no hamuerto, el proceso de tinción la mata.La célula bacteriana posee constituyentes celulares cargados negativamente, tales como losácidosnucleicos y los polisacáridos ácidos, y ellos son los más usados en citologíabacteriana.Las bacterias son ricas en ácidos nucleicos que poseen cargas negativas en forma degrupos fosfatos. Los colorantes básicos tiñen la célula bacteriana uniformemente, a menosque antes sea destruido el ARN del citoplasma.Los colorantes ácidos no tiñen la célula bacteriana, y por lo tanto, pueden usarse paraimpartir alfondo un color de contraste (coloración negativa).Desde el punto de vista práctico entonces, los colorantes básicos tiñen estructuras denaturaleza ácida, como la cromatina nuclear de las células eucariotas y procariotas; loscolorantes ácidos reaccionan con sustancias básicas, como las estructuras citoplasmáticasde las células eucariotas.
b)
 
Colorantes liposolubles
 Los colorantesliposolubles se combinan con los componentes lipídicos de la célula,usándose a menudo para revelar la localización de los depósitos de grasa. Ej. Negro Sudán.En algunos casos se usan mordientes con la finalidad de engrosar estructuras muy finas, conel propósito de hacerlas visibles al microscopio óptico; uno de ellos es el ácido tánico que seemplea en la coloración de flagelos y espiroquetas

 
4.3.TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN COLOREADA
 
Una preparación coloreada exige la sucesión de tres pasos: preparación del extendido,fijación y coloración.
1.- Preparación del extendido
Debe utilizarse un portaobjetos limpio y desengrasado.Si el cultivo proviene de un medio líquido, se transfiere con ansa una gota del mismo y seextiende hasta formar una fina película que cubra el centro delportaobjetos.Si el cultivo proviene de un medio sólido, se procede así de la siguiente manera:
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Con pipeta o ansa se coloca una gota de agua en el centro del portaobjetos
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Se quema el exceso de cultivo que queda en el ansa, se deja enfriar y luego se extiendela suspensión bacteriana hasta formar una fina película sobre el portaobjetos sin tocar losbordes.
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Esperar hasta que el líquido seevapore o bien acelerar el proceso acercando elportaobjteto al aire caliente de la llama del mechero.
2.- Fijación
Este segundo paso se efectúa para que los microorganismos queden adheridos al vidrio y nose desprendan del portaobjetos con los lavados a los que hay que someterlosposteriormente.La fijación coagula las sustancias proteicas de las células, lo cual hace que losmicroorganismos queden...