tinciones

PRACTICA DE LABORATORIO 5
TECNICA DE TINCION GRAM
OBJETIVO:
1. Emplear técnicas bacteriológicas simples.
2. Conocer el fundamento estructural de la Tinción de Gram.
3. Utilizar colorantes y comprender su utilización.
4. Utilizar el microscopio con el objetivo de inmersión.
5. Observar células procariotas.
Lograr el óptimo procedimiento para poder aprender la técnica de Tinción Gram detodos los integrantes del grupo y comprender la importancia y la diferencia entra las estructuras de las diferentes bacterias

INTRODUCCIÓN:
La tinción de Gram es un tipo de tinción empleado en microbiología para la visualización de las bacterias, debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram que desarrolló un método de tinción en 1884.Por más de una centuria las bacterias han sidoclasificadas a la reacción de Gram, la habilidad de retener un complejo de iodo violeta cuando se trata con un solvente orgánico tal como el alcohol o la acetona , las bacterias Gram positivas retienen la tintura ya parecen de color violeta, mientras que las Gram negativas no lo pueden retener y se tiñen de color rojo para ser vistas con el microscopio. En esta práctica de microbiología se va a realizarla técnica de Tinción Gram para poder examinar las células bacterianas que se encuentran en el yogurt determinar al tipo al que pertenecen.
MATERIALES
1. 3 Portaobjetos
2. Goteros
3. Pipetas
4. Mechero
5. Microscopio con lente de inmersión
REACTIVOS
Agua destilada.
Cristal violeta.
Placa inoculada
Solución de Lugol
Alcohol 95º
Solución Fucsina o Safranina para contra teñir.PROCEDIMIENTO:
SIEMBRA:
Preparar una porta bien limpio y Coger una porción de la colonia de bacterias más aislada con un palillo o una aguja enmangada y hacer una extensión sobre el porta.




FROTIS:
Se fijó las células de ida y vuelta – hasta que se desagrego - hasta la mitad del portaobjetos.

FIJACIÓN:
Con esto evitamos que cualquier sustancia infecte nuestra muestra y luego, quenuestra muestra permanezca en el porta objeto (Se fijó por calor – a mechero)
TÉCNICA DE TINCIÓN:
Sobre el frotis fijado se vertió la solución de violeta y se deje en reposo 1 minuto siempre que colocamos un colorante o mordiente es recomendable deshacerse de los excesos de líquido ya que pueden interferir cuando apliquemos otra sustancia. Cubrir con Lugol durante 3´. El Lugol actúa como "mordiente",vale decir, cristaliza la solución Violeta de Genciana formando un complejo insoluble en H2O pero soluble en alcohol-acetona. El Lugol forma un complejo cristal violeta-iodo). Si hay excedente se lava. En este caso hubo exceso.
DECOLORACIÓN
Con alcohol al 95 % durante 1 min moviendo el portaobjetos en ambos lados o a cada extremo, hasta que desaparezcan los chorros gris violáceos del colorante.Después lave con agua. Este paso es fundamental porque en el reside la respuesta diferencial de las
Gram + y las Gram –. Sabemos que el alcohol deshidrata y contrae las células por contacto. Sabemos también que los poros de las Gram + son mas pequeños que los de las Gram -Entonces, la solución alcohol, contrae los poros de las bacterias cerrando completamente los de las Gram + y parcialmente losde las Gram -. El resultado es que dicha solución ingresa en estas últimas decolorándolas. Hasta aquí tenemos las Gram + violetas y cerradas y las Gram - incoloras y abiertas.

CONTRATINCIÓN:
Sobre el frotis se echó 2 gotas de Safranina básica es parcialmente soluble en H2O e ingresará sólo en las Gram - ya que las otras continúan cerradas por efecto del alcohol-acetona. La safraninaBásicamente interactúa con la membrana celular y forma un complejo insoluble en H2O. Para realizar la contra tinción y realizar frotis. Al cabo de 1 ó 2 minutos se vierte el colorante, el preparado se lava con agua si es que hay exceso, y se deja secar.
ELIMINAR EL EXCESO:
Y lavar con H2O para eliminar restos de colorante. Si bien los colorantes ahora son insolubles en agua (recordemos que el Violeta...