Tipos de pcr

TIPOS DE PCR

PCR anidada:
Técnica muy sensible de PCR en la que el producto de una amplificación es utilizado como molde para realizar una segunda amplificación con cebadores que se ubican dentro de la primera secuencia amplificada. Este tipo de PCR es muy específica.
Nested polymerase chain reaction is a modification of polymerase chain reaction intended to reduce the contamination inproducts due to the amplification of unexpected primer binding sites. Es una modificación de la reacción en cadena de la polimerasa por objeto reducir la contaminación en los productos debido a la amplificación de los sitios de unión del cebador inesperado.

PCR anidada significa que dos pares de cebadores de PCR se utilizaron para un solo locus (figura 1). The first pair amplified the locus as seenin any PCR experiment. El primer par amplifica el lugar como se ve en cualquier experimento de PCR. The second pair of primers ( nested primers ) bind within the first PCR product (figure 4) and produce a second PCR product that will be shorter than the first one (figure 5). El segundo par de iniciadores (primers anidados) se unen en el producto de la PCR en primer lugar (figura 4) y producir unproducto de PCR segundo que será más corto que el primero (figura 5). The logic behind this strategy is that if the wrong locus were amplified by mistake, the probability is very low that it would also be amplified a second time by a second pair of primers. La lógica detrás de esta estrategia es que si el lugar equivocado fueron amplificados por error, la probabilidad es muy baja, que tambiénsería ampliado por segunda vez por un segundo par de cebadores.

Figure 1. Nested PCR strategy. Figura 1. Estrategia de PCR anidada. Segment of DNA with dots representing nondiscript DNA sequence of unspecified length. Segmento de ADN con los puntos que representan la secuencia de ADN nondiscript de longitud no especificada. The double lines represent a large distance between the portion of DNAillustrated in this figure. Las líneas dobles representan una gran distancia entre la porción de ADN se ilustra en esta figura. The portions of DNA shown with four bases in a row represent PCR primer binding sites, though real primers would be longer. Las porciones de ADN muestra con cuatro bases en una fila representan PCR imprimación sitios de unión, aunque cartillas real sería más largo.

Figure2. The first pair of PCR primers (blue with arrows) bind to the outer pair of primer binding sites and amplify all the DNA in between these two sites.
Figura 2. El primer par de cebadores de PCR (azul con flechas) se unen a la pareja exterior de imprimación sitios de unión y ampliar todo el ADN entre estos dos sitios.

Figure 3. PCR product after the first round of amiplificaiton. Figura 3.Producto de PCR después de la primera ronda de amplificación. Notice that the bases outside the PCR primer pair are not present in the product. Tenga en cuenta que las bases fuera de la pareja de cebadores de PCR no están presentes en el producto.

Figure 4. Second pair of nested primers (red with arrows) bind to the first PCR product. Figura 4. Segundo par de cebadores anidados (rojo conflechas) se unen al producto de la PCR en primer lugar. The binding sites for the second pair of primers are a few bases "internal" to the first primer binding sites. Los sitios de unión para el segundo par de cebadores son unas pocas bases "interno" a los sitios de unión del cebador en primer lugar.

Figure 5. Final PCR product after second round of PCR. Figura 5. Producto de PCR final después dela segunda ronda de PCR. The length of the product is defined by the location of the internal primer binding sites. La duración del producto es definido por la ubicación de los sitios de unión del cebador interno.

When a complete genome sequence is known, it is easier to be sure you will not amplify the wrong locus but since very few of the world's genomes have been sequenced completely,...