TP Cloroplastos


TRABAJO PRÁCTICO N° 7

CLOROPLASTOS



Integrantes

Judith Banchik Kremer
Agustina Vidal Yáñez















Objetivos

Este trabajo consta de tres objetivos. El primero, aislar cloroplastos de espinaca. El segundo, medir su actividad fotosintética. Y por último, el efecto de distintas longitudes de onda y detergentes sobre esa actividad fotosintética.Introducción

La vida en la tierra se debe fundamentalmente a la capacidad autótrofa de algunos organismos como vegetales, algas y algunas bacterias. Estos organismos son capaces de sintetizar todas las sustancias esenciales para su metabolismo a partir de sustancias inorgánicas. Las plantas y otros organismos se denominan fotolitoautótrofos porque llevan a cabo la fotosíntesis. Este es un proceso queconsta de dos etapas, la primera, llamada etapa fotodependiente, se lleva a cabo en las membranas internas de los cloroplastos y la segunda, llamada etapa bioquímica o ciclo de Calvin, ocurre de manera independiente a la presencia de luz en el estroma del mismo.
La fase clara, fotoquímica o reacción de Hill se refiere a la primer fase de la fotosíntesis que depende directamente de la energíaluminosa para la obtención de energía química en forma de ATP y NAHPH, a partir de la disociación de moléculas de agua, formando oxígeno e hidrógeno. Este proceso se realiza en la cadena transportadora de electrones del cloroplasto en los complejos clorofila-proteína que se agrupan en unidades llamadas fotosistemas, ubicados en las membranas internas denominadas tilacoides.
Existen dos tipos defotosistemas muy separados entre sí. El centro de la reacción del fotosistema I, sus pigmentos antena asociados, las proteínas de transferencia de electrones y la enzima que cataliza la formación de ATP se encuentran casi exclusivamente en las lamelas del esrtomas y los extremos de los grana. En cambio, el centro de reacción del fotosistema II, sus clorofilas y proteínas asociadas se encuentrasmayormente en los grana.
La capacidad de la clorofila para captar la luz depende directamente de su estructura electrónica: esto la hace sensible a determinadas longitudes de onda que coinciden con casi todo el espectro de luz visible (350-750). Mayores longitudes de onda carecen de la energía suficiente para excitar electrones, mientras que menores longitudes de onda resultan nocivas para elmaterial genético.
Los pigmentos accesorios funcionan como receptores suplementarios de luz, captando otras longitudes de onda y transfiriéndolas hacia la clorofila. Cuando los electrones de un fotosistema captan la luz, se excitan, aumentando así la energía y haciendo que se desprendan de la molécula para pasar a otras moléculas aceptoras de distinto nivel energético.
Paralelamente, se produce unaruptura de la molécula de agua que genera oxígeno y protones hidrógeno que, junto con algunos electrones de los liberados anteriormente, reducen la coenzima NADP+ generando NADPH + H+ (que será utilizado como poder reductor para el dióxido de carbono en la segunda etapa). Algunos de los otros electrones liberados por los fotosistemas generan energía suficiente como para fosforilar ADP y obtenerATP (también utilizado en las reacciones de biosíntesis siguientes).
De esta manera, los electrones que se desprenden del fotosistema I, reducen al NADP+, los del fotosistema II llenan el hueco que había quedado en el fotosistema I; y los que se desprenden por hidrólisis del agua, llenan el hueco del fotosistema II.
La fórmula global de esta etapa es a siguiente:

ADP + P + NADP+ + H20ATP + NADPH + H+ + ½ O2

Para estudiar la actividad fotosintética de los cloroplastos llevamos a cabo la reacción de Hill, haciendo una transferencia de electrones mediada por la luz desde la molécula de agua hacia un compuesto que presente distinto color cuando este oxidado y reducido. En este caso utilizamos DCPIP (Dichlorophenolindophenol) que es de color azul cuando está...