trabajo practico catalasa

Trabajo Práctico N° 5
Acción de la catalasa – Parte I



Objetivos: Evaluar variables que influyen sobres las reacciones enzimáticas. En este práctico en particular se evaluará el efecto de la concentración del substrato en la actividad enzimática de la catalasa.

Introducción: Las células de todos los organismos vivos deben eliminar, los metabolitos citotóxicos. Una forma de eliminación esmediante la actividad enzimática. Existen diferentes mecanismos enzimáticos involucrados en la desintoxicación del organismo. Uno de estos mecanismos, universalmente adoptado por los seres vivos, está relacionado con la actividad de la enzima catalasa, la que se encuentra presente en organelas denominadas peroxisomas. Esta enzima actúa sobre un substrato, el peróxido de hidrógeno, (H2O2), producidonormalmente en las células como producto de la acción de factores medio ambientales tanto como por la actividad normal de la célula (Vega y Pizarro, 2000; Curtis y Barnes, 2000). El peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) es un oxidante muy potente, que destruye casi cualquier membrana y biomolécula a su paso (de aquí sus propiedades antisépticas). Por esta razón debe ser eliminado rápidamentepor la célula para evitar sus efectos letales.
La reacción enzimática se resume como:
catalasa
2 H2O2 2 H2O + O2 (1)
Substrato enzima Productos

Tal como se desprende de la ecuación (1) los productos de esta reacción son totalmente inofensivos para elorganismo.
Una de las funciones del hígado es la desintoxicación, por lo tanto en él se encuentran presente altas concentraciones de catalasa.


PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN

¿Si se varía la concentración del substrato se observarán cambios en el volumen de oxígeno liberado?


Hipótesis:

La actividad enzimática de la catalasa depende de la concentración del substrato (peróxido de hidrógeno) por lotanto una variación en la concentración de peróxido de hidrógeno modificará los productos obtenidos (oxígeno y agua)

Predicciones basadas en las hipótesis:

1. A bajas concentraciones del substrato la actividad enzimática será directamente proporcional a la concentración del substrato liberando un mayor volumen de oxígeno en función del tiempo
2. A altas concentraciones del substrato la actividadenzimática será constante, por lo tanto el volumen de oxígeno liberado permanecerá invariable en función del tiempo debido a que se habrá encontrado un punto de saturación (Allot, 2001).

Variable independiente: Tiempo
Variable dependiente: Volumen de oxígeno liberado.
Variables de control: Temperatura, presión, concentración de hígado (masa de hígado/volumen de agua). Concentración de peróxidode hidrógeno. La concentración de hígado se mantiene constante para mantener constante de forma indirecta la concentración de la catalasa.




Desarrollo experimental

Materiales:
Hígado de vaca molido
1 pecera
Balanza PRECISION (± 0,1 g)
Caja de Petri
Pipeta Pasteur 3 ml ± 0,25 ml
Soluciones de peróxido de hidrógeno al 15%, 10%, 5%, y 2.5% v/v.
1 mortero
1 jeringa 25 ml ± 0.5 ml
1 probetagraduada de 100 ml ± 1 ml
1 probeta graduada de 250 ml ± 2,5 ml
1 tubo de ensayo de 50 ml
1 tapón de goma con dos agujeros
1 manguera de goma
2 tubos de vidrio acodados
1 soporte universal
1 agarradera con nuez
1 cronómetro
Termómetro ± 0.5° C

Métodos:

Pesar la masa total de hígado, molerla y diluirla en un volumen de agua hasta alcanzar 0,08 g/ml (gramos de hígado por mililitros).
Montar el soporteuniversal, con una agarradera con nuez y un tubo de ensayo de 50 ml (Fig. 1).
Llenar una pecera con agua, llenar la probeta graduada con agua (completamente) y dejarla en el fondo.
Llenar una jeringa con 10 ml de agua oxigenada al 15% v/v (recuerde que esta es la concentración del substrato que variará en diferentes mediciones). Introdúzcala en uno de los agujeros del tapón de goma. En el otro...