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ACTUALIZACIÓN EN CONOCIMIENTOS DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y BIOTECNOLOGÍA

ADN recombinante: técnicas de Ingeniería Genética

Dr. Ismael Cross Pacheco Dr. Ismael Cross Pacheco UNIVERSIDAD DE CÁDIZ UNIVERSIDAD DE CÁDIZ
Laboratorio de Genética Laboratorio de Genética Facultad de Ciencias del Mar y Ambientales Facultad de Ciencias del Mar y Ambientales GRUPO DE INVESTIGACIÓN GRUPO DE INVESTIGACIÓNGENÉTICA MOLECULAR Y DE POBLACIONES GENÉTICA MOLECULAR Y DE POBLACIONES

ÍNDICE
1. Introducción 2. Construcción de ADN recombinante
Aislamiento del ADN Digestión del ADN: enzimas de restricción Ligación del ADN y Amplificación Vectores de clonación

3. Bibliotecas de genes: Genotecas
Genotecas genómicas Genotecas de cDNA Genotecas cromosómicas

4. Identificación de clones mediante el usode sondas 5. Técnicas de análisis de las secuencias clonadas:
Electroforesis, PCR, secuenciación.

6. Algunas aplicaciones:
Producción de insulina Biotecnología: Animales transgénicos Productos farmacéuticos en huéspedes animales (Biorreactores) (Biorreactores) Plantas transgénicas Terapia Génica

1.- Introducción
1. Introducción

HITOS HISTÓRICOS
2. Construcción de ADN recombinanteTeoría cromosómica de la herencia: Morgan y col. (1933) ADN es la molécula que transporta la información genética (1944) Descubrimiento de la estructura del ADN y el código genético (1953) Desarrollo y aplicación de la tecnología del ADN recombinante (Arber y col., 1978): - Aislar secuencias de ADN: secuencia, evolución, función... - Clonación - Genotecas - Terapias génicas - Transferencia degenes entre especies - Biotecnología .... etc.

3. Bibliotecas de genes: - Genot. génómicas Genot. - Genot. cDNA

4. Identificación de clones mediante el uso de sondas

5. Técnicas de análisis de las secuencias clonadas

6.Algunas aplicaciones: - Insulina - Biotecnología - Terapia génica

2.- Proceso general en la construcción de ADN recombinante
1. Introducción

2. Construcción de ADNrecombinante

- Todo se puede resumir en : “Cortar-pegar-copiar”

3. Bibliotecas de genes: - Genot. génómicas - Genot. cDNA

4. Identificación de clones mediante el uso de sondas

5. Técnicas de análisis de las secuencias clonadas

6.Algunas aplicaciones: - Insulina - Biotecnología - Terapia génica

2.- Proceso general en la construcción de ADN recombinante
1. Introducción

2.Construcción de ADN recombinante

3. Bibliotecas de genes: - Genot. génómicas - Genot. cDNA

4. Identificación de clones mediante el uso de sondas

5. Técnicas de análisis de las secuencias clonadas

6.Algunas aplicaciones: - Insulina - Biotecnología - Terapia génica

2.- Proceso general en la construcción de ADN recombinante
1. Introducción

2. Construcción de ADN recombinante

1.-Digestión del ADN - Enzimas de restricción: Arber, Smith y Nathans: Nobel en 1978

3. Bibliotecas de genes: - Genot. génómicas - Genot. cDNA

- Utilizan las bacterias para cortar ADN foráneo - Cortan en unas secuencias del ADN: dianas de restricción

4. Identificación de clones mediante el uso de sondas

- Tipo II: reconocen la diana y cortan en ese punto

5. Técnicas de análisis de lassecuencias clonadas

G-A-A-T-T-C C-T-T-A-A-G G C-T-T-A-A A-A-T-T-C G

Eco RI

6.Algunas aplicaciones: - Insulina - Biotecnología - Terapia génica

2.- Proceso general en la construcción de ADN recombinante
1. Introducción

1.- Digestión del ADN
2. Construcción de ADN recombinante

G-A-A-T-T-C C-T-T-A-A-C
Corte con Eco RI

G-A-A-T-T-C C-T-T-A-A-C
Corte con Eco RI

3. Bibliotecasde genes: - Genot. génómicas - Genot. cDNA

G C-T-T-A-A

4. Identificación de clones mediante el uso de sondas

A-A-T-T-C G

Fragmentos con colas complementarias

5. Técnicas de análisis de las secuencias clonadas

2. Unión

G A-A-T-T-C C-T-T-A-A G
ADN ligasa

6.Algunas aplicaciones: - Insulina - Biotecnología - Terapia génica

G- A-A-T-T-C C-T-T-A-A - G

2.- Proceso general...
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