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INTRODUCCIÓN

El cultivo de tejidos vegetales o cultivo in vitro de tejidos vegetales, es una técnica de reproducción en condiciones totalmente asépticas, en la que a partir de un pequeño segmento inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas genéticamente iguales a la planta madre, cuando a este tejido le es aplicado un estímulo por medio de variablesfísicas y químicas controladas en un medio de cultivo.
A diferencia de las técnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la propagación de grandes volúmenes de plantas en menor tiempo; así como el manejo de las mismas en espacios reducidos. Por otro lado, la técnica es de gran utilidad en la obtención de plantas libres de patógenos; plantas homocigotas, en la producción de plantasen peligro de extinción, en estudios de ingeniería genética, etc. El enorme potencial que posee esta metodología ha propiciado que en los últimos 25 años se haya incrementado el número de laboratorios de cultivo de tejidos en los países para la producción comercial de plantas frutales al lo que ha motivado que algunos fruticultores la estén utilizando como una alternativa viable en sus programasde producción.
En cítricos la infección relacionados con virus y patógenos es de importancia en nuestro país, puesto que afecta su productividad, vigor, rendimiento y calidad. Estos problemas son atribuidos a agentes patógenos como el virus tristeza (CTV), exocortis, y psorosis.

Objetivos

Hallar las variables que influencian sobre el crecimiento nucelar in vitro y evaluar cualitativamenteel desarrollo in vitro de la nucela.
Demostrar el proceso de obtención de patrones de mandarinas libres de enfermedades, asimismo conocer cual es el más adecuado para la microinjertación.

Materiales y Métodos

Explante : Semillas de mandarina, obtenidas de un fruto maduro.
Detergente.
Alcohol.
Lejía.
Medio de cultivo M.S
Esta práctica se realizo en el laboratorio de biotecnología de laUNALM, contando con todos los equipos y materiales básicos, así como las condiciones asépticas necesarias para la propagación in vitro.

Metodología

Fase I: Establecimiento de los cultivos in vitro

El explante inicial consistió en embriones de mandarina los cuales se adquirieron de un fruto maduro proveniente de un supermercado.

Predesinfestación: los explantes iniciales se obtuvierondel fruto maduro para lo cual se separaron los embriones más vigorosos y se lavaron con agua y detergente.

Desinfestación: dentro de una campana de flujo laminar los embriones se sumergieron en una solución de lejía en constante agitación durante 10 minutos, se aplicaron tres enjuagues de tres minutos cada uno con agua destilada estéril. Después se colocaron en una placa, y con la ayuda de unapinza y una cuchilla se procedió a quitar la cubierta exterior del embrión, y se sembraron secciones de embriones de aproximadamente 2 por semilla.

La siembra de semillas se realizó en un medio nutritivo de acuerdo a la formulación de Murashige & Skoog (1962).
Con la ayuda de las pinzas se colocaron las semillas en tubos de ensayo que contenían el medio de cultivo M.S.
Luego se trasladaron auna cámara de incubación a una temperatura de 25 ± 2º C, y bajo una intensidad luminosa de 2000 lux (lámparas slime line marca Phillips). Las semillas fueron incubadas a la misma temperatura pero en ausencia de luz.

Las plántulas se dejan crecer durante 2 a 4 semanas. Una vez crecidas se cortan a una altura de 1.5 a 3.0 cm del cuello y se suprime la parte de la raíz para dejar finalmente unaporción de sistema radical de 3,5 a 6.0 cm.
Así habremos obtenido el patrón, para luego hacer el microinjerto in vitro.
Luego se selecciona las yemas y se procede a microinjertar. Para facilitar el prendimiento se utiliza el pegamento : Polietilen-glicol.
Cuando la yema empieza a desarrollarse se cambia de medio de cultivo.
Finalmente se saca la planta ya injertada, se lava las raíces , y...
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