Técnicas histológicas

Técnicas histológicas vamos a describir los procesos experimentales necesarios para obtener secciones teñidas y listas para observar al microscopio partiendo de tejidos vivos extraídos de un animal o de un vegetal
Fijación, inclusión, corte y tinción de los tejidos.
La mayoría de las técnicas histológicas van encaminadas a preparar el tejido para su observación con el microscopio, bien seaóptico o electrónico.
Existen procedimientos para la observación de tejidos y células vivas que reciben el nombre de vitales. Las técnicas histológicas postvitales son aquellas en las que las células mueren durante el proceso, pero las características morfológicas y moleculares que poseían en estado vivo se conservan, más o menos dependiendo del tipo de técnica.
FIJACION
Inmersión. Por el método deinmersión las piezas de tejido se sumergen en la solución fijadora. Tenemos que tener en cuenta algunas precauciones.
1) Las piezas de tejido no deberían superar los 0.5 cm de espesor para que el fijador alcance el interior de la pieza antes de que ésta comience a deteriorarse. Esto depende de la velocidad de penetración del fijador y de las características del tejido, por ejemplo, si tienecavidades por donde penetre la solución fijadora.
2) El volumen recomendado de fijador debe ser 20 veces superior al volumen de la pieza.
3) La osmolaridad entre tejido y solución fijadora deben estar equilibradas.
4) El pH del fijador debe ser próximo al fisiológico.
5) El tiempo de fijación depende de cada tipo de fijador, pero generalmente existe un tiempo máximo para cada uno de ellos queno debe ser excedido.
INCLUCION
Para la inclusión de muestras que han de observarse con microscopía óptica se utiliza sobre todo la parafina, y en menor medida la celoidina, como medio de inclusión. Vamos a describir los pasos para la inclusión en parafina de muestras de tejido previamente fijadas.
La parafina es una sustancia de aspecto ceroso que está formada por mezclas de hidrocarburossaturados. A temperatura ambiente es sólida y su punto de fusión puede variar entre 40 y 70 °C según su composición de la mezcla de hidrocarburos. Resultan distintos tipos de parafinas a temperatura ambiente que se emplean según las necesidades. Así, parafinas más duras a temperatura ambiente tienen un punto de fusión mayor, mientras que las más blandas uno menor. Es recomendable una dureza mayorpara incluir muestras más duras. Las parafinas más usadas tienen un punto de fusión en torno a los 60 °C. Podemos también modificar las características de las parafinas añadiendo sustancias para variar su dureza, viscosidad, fragilidad, etcétera.
La parafina no es miscible con agua, mientras que todos los tejidos están formados principalmente por agua. Además, la mayoría de los fijadores sonsoluciones acuosas. Esto implica que para que la parafina líquida pueda penetrar completamente en el tejido ha de sustituirse el agua por un solvente orgánico. Esto se consigue mediante la deshidratación del tejido en alcoholes, normalmente metanol, de gradación creciente hasta alcohol de 100°. Posteriormente se transfiere el tejido a un líquido que sea miscible tanto con el alcohol de 100° como con laparafina, denominado sustancia intermediaria, como es el benceno, xileno, tolueno o el óxido de propileno, entre otros. Estas sustancias son normalmente aclarantes por lo que comprobando la translucidez de la pieza podemos cerciorarnos de la penetración de la sustancia intermediaria en el tejido. El tiempo de incubación de la pieza, algunos de estos líquidos intermediarios como el tolueno oxileno no debe ser excesivo puesto que estas sustancias endurecen la pieza y provocar problemas hacer las secciones.
Por último se pasa el tejido a parafina previamente licuada en una estufa regulada a la temperatura apropiada para dicho tipo de parafina. Se dan tres pasos por parafina para favorecer una buena impregnación. El tiempo que duran dichos pasos depende de lo volátil que sea el líquido...