técnicas inmunologicas

- GUIA DE TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS 2010 INDICE
1. Interacción antígeno-anticuerpo

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2. Interacción Secundaria Ag-Ac

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2.a. Reacciones de precipitación

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2.b. Técnicas inmunológicas basadas en reacciones de precipitación.

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Inmunodifusión Radial

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Inmunoelectroforesis

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2.c. Reacciones de aglutinación

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2.d.Concepto de título

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3. Interacción primaria Ag-Ac
3.a. Inmunomarcación

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Inmunomarcación con Acs conjugados a ENZIMAS

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Inmunomarcación con Acs conjugados a FLUOROCROMOS

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Citometría de Flujo

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3.b. Radioinmunoanálisis y Técnicas radioinmunométricas

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3.c. ELISA (Enzime Linked ImmunoadSorbent Assay)Página 13

4. Otras técnicas
4.a. Proteinograma electroforético

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4.b. Nefelometría

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4.c. Western Blot

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5. Técnicas de tipificación de antígenos de histocompatibilidad

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5.a. Técnicas serológicas

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5.b. Técnicas moleculares

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6. Cross match

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7. Técnicas inmunológicas para estudiar la funcionalidadde los fagocitos

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1. INTERACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO
La unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una interacción reversible en la que están involucrados enlaces nocovalentes. En la interacción in vitro de un antígeno (Ag) con su correspondiente anticuerpo (Ac) se
distinguen dos etapas, la interacción primaria no visualizable y la interacción secundaria, que sigue a la
anterior y secaracteriza por la aparición de un fenómeno visible como la aglutinación o la precipitación. Por
otro lado, no siempre que se produce la interacción primaria Ag-Ac, se produce la interacción secundaria, ya
que, para conseguir fenómenos visibles, son indispensables determinadas concentraciones y características
de los Ags y Acs.
2. INTERACCIÓN SECUNDARIA ANTIGENO-ANTICUERPO.
Las técnicasinmunológicas que evidencian la interacción Ag-Ac a través de una reacción secundaria
(precipitación o aglutinación) son, generalmente, más económicas y sencillas que aquellas que permiten
visualizar la interacción primaria (ver más adelante).
2.a. Reacciones de precipitación
Al mezclar cantidades suficientes de Ag soluble con Acs específicos, la interacción Ag -Ac puede dar lugar a
una redcapaz de ser visualizada como un precipitado. Esa red de la que hablamos, no es otra cosa que
grandes complejos inmunes (CI) formados por la interacción Ag-Ac. Tal como se observa en la figura, cuando
se agregan concentraciones crecientes de Ag soluble a una cantidad fija de suero conteniendo Acs
específicos, a medida que la cantidad de Ag agregado aumenta, la cantidad de precipitado seincrementa
hasta alcanzar un máximo, luego del cual declina.
En un extremo de la curva de precipitación, cuando se agregan pequeñas cantidades de Ag, los CI se forman
en exceso de Ac. En el otro extremo, al agregar grandes cant idades de Ag, los CI se forman en exceso de
Ag siendo pequeños y probablemente constituidos por una molécula de Ac y dos de Ag. Entre estas dos
situaciones extremas seencuentra la zona de equivalencia, en donde la relación Ag-Ac permite la formación
de grandes redes de CI que precipitan.
Exceso
de Ac

Equivalencia

Exceso
de Ag

Cantidad de Ag agregado
La reacción de precipitación depende de la VALENCIA del Ac y del Ag. La valencia del Ac da idea del número
de sitios que posee para reconocer al Ag. De esta manera, un Ac bivalente posee dos sitios capacesde
reconocer al Ag. Del mismo modo, la valencia de un Ag nos habla del máximo número de epitopes que
posee. Para que se pueda producir la interacción secundaria Ag-Ag con la consecuente formación del
precipitado, tanto el Ag como el Ac deben ser, al menos, bivalentes.

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La asociación entre Ac bivalentes y Ag
monovalentes (un único epitope no repetido)
no permite la formación de CI...