ureasa

UREA-UV

Urea
Ureasa -GLDH. Cinético UV
Determinación cuantitativa de urea
IVD

4.
5.

Mezclar y leer las absorbancias a los 30 s (A1) y a los 90 s (A2).
Calcular: ∆A= A1 – A2.Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL METODO
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en
amoníaco (NH3) y anhídrido carbónico (CO2).
El amoníaco formado se incorporan alα-cetoglutarato por acción de la
glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a
NAD+ :
Ureasa

Urea + H2O + 2 H ⎯⎯⎯ ⎯→ 2 NH3 + CO2
+

GLDH

2 NH3 + α-Cetoglutarato + NADH ⎯⎯⎯ → H2O +NAD + L-Glutamato
⎯
La disminución de la concentración de NAD+ en el medio es proporcional
a la concentración de urea de la muestra ensayada1.
+

SIGNIFICADO CLINICO
La urea es el resultado finaldel metabolismo de las proteínas; se forma en
el hígado a partir de su destrucción.
Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso
de proteínas, enfermedades renales,insuficiencia cardiaca, hemorragias
gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales 1,4,5.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio.REACTIVOS
TRIS pH 7,8
80 mmol/L
R1
6 mmol/L
Tampón
α-Cetoglutarato
Ureasa
3750 U/L
R2
Glutamato deshidrogenasa (GLDH)
6000 U/L
Enzimas
NADH
0,32 mmol/L
UREA CAL
Patrón primario acuoso de Urea50 mg/dL
PREPARACION
Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( → ) el contenido de un vial de R 2
Enzimas en un frasco de R 1 Tampón.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.Estabilidad: 6 semanas a 2-8ºC o 7 días a 15-25ºC.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascosbien cerrados a
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos
fuera de la fecha indicada.
UREA CAL
Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien...