Uso de plasmidos

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Plásmido pBR 322
El plásmido PBR 322 es el primer plásmido artificial y el más famoso (es un vector de Escherichia coli) creado en 1977 por 2 científicos mexicanos: Fco.Bolívar y Rodríguez (de ahí el nombre p, por plásmido. BR por bolívar y rodríguezcorrespondientemente) formado por 4361 pares de bases.
El plásmido PBR 322 es el másampliamente usado para clonar, es de pequeñas dimensiones y lleva los genes para la resistencia a los antibióticos ampicilina y tetraciclina Contiene un solo sitio derestricción.
Diversas endonucleasas de restricción son usadas para introducir fragmentos de DNA, la inserción de este no desactiva la resistencia a los antibióticos. El gen deresistencia a la ampicilina es ß-lactamasa.
Partes del plásmido (sitios)
PstI en el interior del gen amp y sitios únicos de restricción para BamHI y SalI (ambas enzimas)en el interior del gen tet.
EcoRI es una enzima de restricción producida por el microorganismo Escherichia coli que posee una diana de restricción en ADN sobre la cualsu actividad catalítica hidrolasa genera extremos cohesivos.
EcoRv es una endonucleasa de uso común que crea cortes. La enzima reconoce lasecuencia de ADN de 6 bases:5'-GAT; ATC-3' y hace un corte en vertical.
Plásmidos derivados
Los plásmidos derivados del pBR 322 son todos los de la serie pUC la secuencia del tetRhra han sidomodificados y el sitio de corte se encuentra en el gen LacZ.
Plásmido pUC18 contiene también un gen de resistencia a la ampicilina también contiene la ß-galactosidasa una enzimaque degrada determinados azucares. Se ha modificado por ingeniería genética de forma que presente una región poli portadora. Que incluye diversos lugares de restricción.
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