Valoración de antibióticos
Páginas: 16 (3809 palabras)
Publicado: 24 de febrero de 2011
Valoración de antibióticos
De acuerdo a los Métodos Generales de Análisis 0100 se tiene:
La actividad o potencia de un antibiótico puede demostrarse por la inhibición del crecimiento de microorganismos sensibles y específicos. En los antibióticos puede haber ligeros cambios químicos que se traducen en perdida de actividad antimicrobiana que no pueden demostrarse por métodos químicos, poresta razón, en caso de duda respecto a la actividad de un antibiótico, los métodos de valoración microbiológica prevalecen sobre los métodos químicos.
Para valorar microbiológicamente un antibiótico, se pueden emplear dos métodos, ambos para comparar la respuesta del microorganismo de prueba, frente a una sustancia de referencia (SRef) de actividad conocida y una muestra tratada en las mismascondiciones.
Método de cilindro en placa (difusión en agar). Se basa en la difusión del antibiótico desde un cilindro vertical, a través de una superficie con agar inoculado con el microorganismo de prueba. L difusión origina zonas de inhibición del microorganismo cuyo tamaño (diámetro) esta en relación con la concentración del antibiótico.
Método turbidimetrico. Se basa en medirespectrofotométricamente el crecimiento del microorganismo de prueba en un medio de cultivo líquido que permite su rápido crecimiento y en el que al adicionar concentraciones crecientes del antibiótico se inhibe el crecimiento en forma proporcional a la concentración adicionada.
Material y equipo
El material que se usa debe estar limpio y seco, libre de residuos de detergente yantibiótico. El material en contacto con el microorganismo de prueba debe esterilizarse empleando procesos validados.
• Cajas de petri de vidrio o plástico de 20 mm X 100 mm.
• Cilindros de acero inoxidable o porcelana con las siguientes dimensiones:
o Diámetro externo 8 +/- 0.1 mm.
o Diámetro interno 6 +/- 0.1 mm.
o Longitud de 10 +/- 0.1 mm.
• Tapas deporcelana porosa.
• Material volumétrico.
• Tubos de ensayo estériles de 16 mm X 125 mm o de 18 mm X 150 mm, con tapas metálicas o de plástico resistentes a esterilización.
• Incubadora con termostato capaz de mantener la temperatura con variación no mayor de +/- 0.5 ºC de la temperatura seleccionada.
• Baño de agua o aire caliente con termostato capaz de mantener la temperaturaseleccionada con una variación no mayor de +/- 0.1 ºC.
• Espectrofotómetro a una longitud de onda a 530 nm o 580 nm.
• Medidor de zonas de inhibición (comparador óptico o vernier).
Reactivos. MGA 0831
• Solución salina estéril
• Solución de acido clorhídrico 1 N ó 0.5 M.
• Solución de hidróxido de sodio 1 N ó 0.5 M.
• Solución de acido fosfórico 18 N.
•Solución de hidróxido de potasio 10 N.
• Solución de formaldehído al 12 % (v/v) en agua.
Soluciones diluyentes
Preparar las soluciones diluyentes con agua purificada, determinar el pH de la solución, si es necesario ajustar con soluciones de acido fosfórico 18 N o hidróxido de potasio 10 N, según se requiera, para que después de la esterilización se obtenga el pH indicado en cadacaso. A menos que se indique lo contrario esterilizar en autoclave usando procesos validados.
Sustancias de referencia (SRef)
Métodos de secado de la sustancia de referencia
Método 1
En un pesafiltro transferir la cantidad adecuada de la SRef, colocar el pesafiltro destapado en una estufa de vació secar en una atmósfera con 10% de humedad relativa a 60 ºC y una presión de 5 mm de Hgo menor durante 3 hrs al termino abrir la estufa, tapar inmediatamente el pesafiltro y colocar en un desecador con un agente desecante como pentoxido de fósforo o gel de sílice.
Método 2
Proceder como indica el método 1, excepto que secar la SRef a 110 ºC.
Método 3
Proceder como indica el método 1, excepto que secar la SRef a 40 ºC, a un presión de 5 mm de Hg o menor durante 2 hrs....
De acuerdo a los Métodos Generales de Análisis 0100 se tiene:
La actividad o potencia de un antibiótico puede demostrarse por la inhibición del crecimiento de microorganismos sensibles y específicos. En los antibióticos puede haber ligeros cambios químicos que se traducen en perdida de actividad antimicrobiana que no pueden demostrarse por métodos químicos, poresta razón, en caso de duda respecto a la actividad de un antibiótico, los métodos de valoración microbiológica prevalecen sobre los métodos químicos.
Para valorar microbiológicamente un antibiótico, se pueden emplear dos métodos, ambos para comparar la respuesta del microorganismo de prueba, frente a una sustancia de referencia (SRef) de actividad conocida y una muestra tratada en las mismascondiciones.
Método de cilindro en placa (difusión en agar). Se basa en la difusión del antibiótico desde un cilindro vertical, a través de una superficie con agar inoculado con el microorganismo de prueba. L difusión origina zonas de inhibición del microorganismo cuyo tamaño (diámetro) esta en relación con la concentración del antibiótico.
Método turbidimetrico. Se basa en medirespectrofotométricamente el crecimiento del microorganismo de prueba en un medio de cultivo líquido que permite su rápido crecimiento y en el que al adicionar concentraciones crecientes del antibiótico se inhibe el crecimiento en forma proporcional a la concentración adicionada.
Material y equipo
El material que se usa debe estar limpio y seco, libre de residuos de detergente yantibiótico. El material en contacto con el microorganismo de prueba debe esterilizarse empleando procesos validados.
• Cajas de petri de vidrio o plástico de 20 mm X 100 mm.
• Cilindros de acero inoxidable o porcelana con las siguientes dimensiones:
o Diámetro externo 8 +/- 0.1 mm.
o Diámetro interno 6 +/- 0.1 mm.
o Longitud de 10 +/- 0.1 mm.
• Tapas deporcelana porosa.
• Material volumétrico.
• Tubos de ensayo estériles de 16 mm X 125 mm o de 18 mm X 150 mm, con tapas metálicas o de plástico resistentes a esterilización.
• Incubadora con termostato capaz de mantener la temperatura con variación no mayor de +/- 0.5 ºC de la temperatura seleccionada.
• Baño de agua o aire caliente con termostato capaz de mantener la temperaturaseleccionada con una variación no mayor de +/- 0.1 ºC.
• Espectrofotómetro a una longitud de onda a 530 nm o 580 nm.
• Medidor de zonas de inhibición (comparador óptico o vernier).
Reactivos. MGA 0831
• Solución salina estéril
• Solución de acido clorhídrico 1 N ó 0.5 M.
• Solución de hidróxido de sodio 1 N ó 0.5 M.
• Solución de acido fosfórico 18 N.
•Solución de hidróxido de potasio 10 N.
• Solución de formaldehído al 12 % (v/v) en agua.
Soluciones diluyentes
Preparar las soluciones diluyentes con agua purificada, determinar el pH de la solución, si es necesario ajustar con soluciones de acido fosfórico 18 N o hidróxido de potasio 10 N, según se requiera, para que después de la esterilización se obtenga el pH indicado en cadacaso. A menos que se indique lo contrario esterilizar en autoclave usando procesos validados.
Sustancias de referencia (SRef)
Métodos de secado de la sustancia de referencia
Método 1
En un pesafiltro transferir la cantidad adecuada de la SRef, colocar el pesafiltro destapado en una estufa de vació secar en una atmósfera con 10% de humedad relativa a 60 ºC y una presión de 5 mm de Hgo menor durante 3 hrs al termino abrir la estufa, tapar inmediatamente el pesafiltro y colocar en un desecador con un agente desecante como pentoxido de fósforo o gel de sílice.
Método 2
Proceder como indica el método 1, excepto que secar la SRef a 110 ºC.
Método 3
Proceder como indica el método 1, excepto que secar la SRef a 40 ºC, a un presión de 5 mm de Hg o menor durante 2 hrs....
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