Viabilidad De Celulas
Páginas: 11 (2515 palabras)
Publicado: 10 de diciembre de 2012
Evaluación de viabilidad de células de ratas
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UNIVERSIDAD DE LA FRONTERA
FACULTAD DE MEDICINA
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Contenidos
ÍNDICE ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………2
introducción………………………………………………………………………………………………………………………………..……..….…..3-4
material y métodos ………………………………………………………………………………………………..……………..…….........5-6-7-8-9
resultados……………………………………………………………………………………………………………………………….….…………10-11
discusión …………………………………………………………………………………………………………………………………………..........12-13
CONCLUSIÓN……………………………………………………………………………………………………………………………….………….……..14
BIBLIOGRAFÍA……………………………………………………………………………………………………………………………………………..……………...…15
ÍNDICE
Introducción
El día Martes 30 de noviembre, en el departamento de ciencias de la Universidad de la Frontera se llevó a cabo la “Guía de actividadesexperimentales N° 3”. Esta actividad tenía la finalidad la evaluación de la viabilidad celular de un cultivo primario de células de bazo de rata expuesta a agentes tóxicos.
Antes de pasar mas adelante, es necesario conocer los conceptos de viabilidad y también de algunos materiales utilizados para desarrollar esta actividad.
La viabilidad celular es un parámetro de control de calidad muy útil ynecesario al realizar cultivos celulares in vitro, ya sea para fines de investigación o en el mantenimiento de las mismas en bancos de células, en otras palabras, nos permite monitorear el estado que guardan las células a través del tiempo después de someterlas a diferentes tratamientos. Para poder calcular el porcentaje de células viables en un cultivo es necesario distinguir las células vivas delas muertas, después se cuenta la cantidad de células vivas y se divide por la cantidad total de células (vivas y muertas) multiplicada por 100, así se obtiene el porcentaje de viabilidad de las células. 1
La diferenciación de células vivas de las células muertas se lleva a cabo utilizando colorantes vitales, entre ellos, el más usado y el cual nosotros utilizamos en esta actividad es el Azul deTripano (Trypan Blue). Este coloide no tiñe células vivas o tejidos de membrana intactos debido a que estos presentan una membrana selectiva lo que se traduce en una impermeabilidad hacia el colorante azul de tripano; por el contrario, las células que han sufrido algún tipo de rotura en su membrana que las ha llevado a la muerte se tiñen de color azul, lo que nos da a entender que estas retienenel colorante. Es por ello que para hacer el conteo de la viabilidad de las células en un cultivo se utiliza este colorante ya que al observar la muestra al microscopio se diferencian en el color las células vivas y las células muertas, en color blanco y azul respectivamente. 2
Es necesario mencionar también, que en esta actividad práctica se prepararon 3 mezclas distintas con diferentescomponentes cada una; los ingredientes comunes fueron la suspensión celular y el medio celular RPMI-1640. A una mezcla se le adicionó Etanol, a la otra se le agregó extracto citotóxico y la otra se mantuvo sin adicionarle ningún componente.
Para conocer más sobre los materiales y/o reactivos utilizados hay que saber de ellos. La suspensión celular es un sistema heterogéneo en donde encontramoscélulas libres y agregados celulares distribuidos en un medio en movimiento, en este caso se utilizo suspensión celular de bazo de ratón. 3
El etanol es un compuesto químico obtenido de la fermentación del azúcar, además es incoloro e inflamable y produce un efecto genotóxico, es decir, daña el ADN de las células que son sometidas a un tratamiento con él. A pesar de que este pasa sin dificultad através de la membrana la sobrexposición es dañina para la célula.4
El medio celular, RPMI-1640 (Roswell Park Memorial Institute) es una mezcla que contiene sales enriquecidas con amoniaco y otros componentes esenciales para el crecimiento celular en cultivos celulares. Generalmente se destinan a células de cultivo de células animales y humanas,...
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UNIVERSIDAD DE LA FRONTERA
FACULTAD DE MEDICINA
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ÍNDICE ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………2
introducción………………………………………………………………………………………………………………………………..……..….…..3-4
material y métodos ………………………………………………………………………………………………..……………..…….........5-6-7-8-9
resultados……………………………………………………………………………………………………………………………….….…………10-11
discusión …………………………………………………………………………………………………………………………………………..........12-13
CONCLUSIÓN……………………………………………………………………………………………………………………………….………….……..14
BIBLIOGRAFÍA……………………………………………………………………………………………………………………………………………..……………...…15
ÍNDICE
Introducción
El día Martes 30 de noviembre, en el departamento de ciencias de la Universidad de la Frontera se llevó a cabo la “Guía de actividadesexperimentales N° 3”. Esta actividad tenía la finalidad la evaluación de la viabilidad celular de un cultivo primario de células de bazo de rata expuesta a agentes tóxicos.
Antes de pasar mas adelante, es necesario conocer los conceptos de viabilidad y también de algunos materiales utilizados para desarrollar esta actividad.
La viabilidad celular es un parámetro de control de calidad muy útil ynecesario al realizar cultivos celulares in vitro, ya sea para fines de investigación o en el mantenimiento de las mismas en bancos de células, en otras palabras, nos permite monitorear el estado que guardan las células a través del tiempo después de someterlas a diferentes tratamientos. Para poder calcular el porcentaje de células viables en un cultivo es necesario distinguir las células vivas delas muertas, después se cuenta la cantidad de células vivas y se divide por la cantidad total de células (vivas y muertas) multiplicada por 100, así se obtiene el porcentaje de viabilidad de las células. 1
La diferenciación de células vivas de las células muertas se lleva a cabo utilizando colorantes vitales, entre ellos, el más usado y el cual nosotros utilizamos en esta actividad es el Azul deTripano (Trypan Blue). Este coloide no tiñe células vivas o tejidos de membrana intactos debido a que estos presentan una membrana selectiva lo que se traduce en una impermeabilidad hacia el colorante azul de tripano; por el contrario, las células que han sufrido algún tipo de rotura en su membrana que las ha llevado a la muerte se tiñen de color azul, lo que nos da a entender que estas retienenel colorante. Es por ello que para hacer el conteo de la viabilidad de las células en un cultivo se utiliza este colorante ya que al observar la muestra al microscopio se diferencian en el color las células vivas y las células muertas, en color blanco y azul respectivamente. 2
Es necesario mencionar también, que en esta actividad práctica se prepararon 3 mezclas distintas con diferentescomponentes cada una; los ingredientes comunes fueron la suspensión celular y el medio celular RPMI-1640. A una mezcla se le adicionó Etanol, a la otra se le agregó extracto citotóxico y la otra se mantuvo sin adicionarle ningún componente.
Para conocer más sobre los materiales y/o reactivos utilizados hay que saber de ellos. La suspensión celular es un sistema heterogéneo en donde encontramoscélulas libres y agregados celulares distribuidos en un medio en movimiento, en este caso se utilizo suspensión celular de bazo de ratón. 3
El etanol es un compuesto químico obtenido de la fermentación del azúcar, además es incoloro e inflamable y produce un efecto genotóxico, es decir, daña el ADN de las células que son sometidas a un tratamiento con él. A pesar de que este pasa sin dificultad através de la membrana la sobrexposición es dañina para la célula.4
El medio celular, RPMI-1640 (Roswell Park Memorial Institute) es una mezcla que contiene sales enriquecidas con amoniaco y otros componentes esenciales para el crecimiento celular en cultivos celulares. Generalmente se destinan a células de cultivo de células animales y humanas,...
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