Work paper 1 de BIOTECNOLOGIA

Páginas: 9 (2199 palabras) Publicado: 29 de junio de 2015
Work paper#1

1.- A estas enzimas se les conoce con el nombre genérico de nucleasas y entre ellas destacan las endonucleasas de restricción, las cuales reconocen secuencias específicas de nucleótidos en el DNA y luego proceden al rompimiento de algunas de las uniones covalentes en estas secuencias. Las enzimas que llevan a cabo la función contraria a las nucleasas, o sea el formar unionescovalentes fosfodiester entre moléculas de DNA, reciben el nombre genérico de ligasas de DNA. Éstos son dos de los ejemplos más importantes del tipo de enzimas que tienen como sustrato a los ácidos nucleicos.

2.- En muchos experimentos de ingeniería genética es necesario para poder desarrollar un análisis adecuado, remover los grupos fosfato que se encuentran en los extremos de las moléculas de DNA.Las enzimas que pueden llevar a cabo esta función reciben el nombre genérico de fosfatasas. Las fosfatasas pueden remover grupos fosfato tanto de extremos 5' como de los 3' generados por la acción previa de las nucleasas (figura II.4).
MECANISMO DE ACCIÓN DE LA ENZIMA FOSFATASA DE DNA
La figura muestra la hidrólisis o ruptura de los grupos fosfatos terminales de un DNA, por medio de la enzimafosfatasa. Esta enzima genera moléculas de DNA sin grupos fosfato (P) en los extremos de las moléculas de los ácidos nucleicos.
2.1.- Las cinasas de DNA son enzimas que catalizan la función contraria a las fosfatasas, es decir la fosforilación o adición de un grupo fosfato, en un extremo del DNA. Un uso importante de este tipo de enzimas es para
“marcar” el extremo 5' de una molécula de DNA, mediantela incorporación del isótopo radioactivo de fósforo 32 en este extremo, como parte del grupo fosfato que se incorpora (figura II.5).

MECANISMO DE ACCIÓN DE LA ENZIMA CINASA DE DNA
En la figura se muestra el proceso de adición de grupos fosfato en los extremos 5' de una molécula de DNA, por la acción de la enzima llamada polinucleótido cinasa.
El grupo gamma fosfato de la molécula de ATP puede sermarcado con 32P (indicado en rojo), para poder producir así una molécula de DNA marcada radioactivamente en sus extremos. Este tipo de herramienta y de marcaje con radioisótopos ha sido utilizado para obtener la secuencia nucleotídica del DNA o para procesos de hibridación utilizados en el diagnóstico a nivel molecular.

2.2.- Las enzimas que son capaces de unir covalentemente dos moléculas de DNAa través de sus extremos, se denominan ligasas de DNA. Estas enzimas descritas por Berg y Jackson realizan la función opuesta a las nucleasas, es decir, catalizan la formación de enlaces covalentes fosfodiester entre el extremo 5' fosfato de un DNA y el grupo 3'0H de otro (5). Para lograr una reacción exitosa, las cadenas del DNA que van a ser ligadas deben ser orientadas apropiadamente. En estecaso, los extremos cohesivos que generan algunas nucleasas de restricción son adecuados para este fin ya que, a través de ellos, es posible alinear dos moléculas de DNA (figura II.6). Sin embargo algunas enzimas, como la ligasa proveniente del bacteriófago T4, no requiere de este tipo de alineamiento ya que es capaz de ligar entre sí dos fragmentos “rasurados” de DNA.

MECANISMO DE ACCIÓN DE LAENZIMA LIGASA DE DNA
La figura muestra la propiedad de la enzima ligasa para enlazar fragmentos de DNA. La enzima ligasa une covalentemente dos cadenas de DNA, previamente unidas entre sí a través de los puentes de hidrógeno. La ligasa proveniente del bateriófago T4, tiene también la capacidad de unir dos fragmentos de DNA, con extremos rasurados.



3.- Las polimerasas del DNA
Otro tipo de enzimaque es utilizada de una manera muy importante en la ingeniería genética, es la DNA polimerasa o polimerasa del DNA.
Estas enzimas, como su nombre lo indica, catalizan la síntesis de las nuevas cadenas del DNA, usando como molde o templado una de las cadenas originales, siendo por tanto una de las enzimas clave para la replicación del DNA (6) (figuras I.8 y II.7). In vitro, las cadenas nacientes...
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