Yo Y Vosea

Técnica Histológica de Rutina

Prof. Iván Rebolledo

Esquema General
Microscopía Optica
Microscopía Optica
Inmersión, perfusión
Formaldehido
Lavado en agua

Deshidratación :
alcoholes crecientes
xiloles
parafina. Congelación

Parafina :
8 - 12 µm

Desparafinación :
xiloles crecientes
Hidratación :
alcoholes decrecientes
Hematoxilina (H) y
Eosina (E)

Deshidratación :alcoholes crecientes
xiloles
Permount.

Microscopía Electrónica
Microscopía Electrónica

FIJACION

INCLUSION

Inmersión, perfusión
Glutaraldehido
Lavado en buffer PO4

Deshidratación :
acetonas crecientes
óxido propileno
Epon

MICROTOMIA

Grueso : 0.5-1.0 µm
Fino : 60 nm

COLORACION

Grueso : azul de
toluidina.
Fino : acetato de
uranilo y citrato de Pb

MONTAJEGrueso : Permount.

Técnica histológica

Técnica histológica
Las células deben prepararse
adecuadamente
para
ser
analizadas
estructural
y
químicamente con instrumentos
ópticos o electrónicos. La serie de
procesos que incluyen la técnica
histológica corriente son : fijación,
inclusión, corte, tinción y montaje.

1. Fijación
1. 1. Propósito de la fijación :
Es el procedimientodestinado
a preservar la estructura y
composición química de la célula,
lo más cercano a su estado vivo; en
otras palabras, se trata de utilizar
soluciones químicas que minimicen
las alteraciones estructurales y
químicas que normalmente se
producen como consecuencia de la
muerte celular. Además, la fijación
tiene como finalidad proteger las
estructuras celulares contra daños
en losprocedimientos posteriores
(inclusión, corte y tinción).
1. 2. Mecanismo de acción de la
fijación :
La mayoría de los fijadores son
soluciones que actúan sobre las
porciones proteicas de la célula. El
buen fijador debe ser aquel que
precipite las proteínas lo más fino
posible, para que el aspecto celular
no se modifique. Por ejemplo, el
fijador más comúnmente usado en
MO es el formol oformalina.

La formalina tiene como fórmula
H-CHO, la cual es capaz de
reaccionar con los grupos amino y
carboxilo
de
las
proteínas,
produciendo uniones metilénicos
con otras moléculas proteicas, así,
las proteínas precipitan formando
mallas.
La desventaja de este mecanismo
de acción molecular es que puede
extraer sustancias químicas vitales
para estudios histoquímicos, por
ejemplo, elglucógeno de las células
hepáticas; esto se obvia eligiendo
otra solución fijadora.
En conclusión, la elección del
fijador debe estar de acuerdo con el
propósito de la experimentación.
1.3. Características de un fijador :
1.3.1. El fijador penetra en el trozo
del tejido por difusión, de manera
que se produce una gradiente de
concentración del fijador, que
depende de varios factores :capacidad de penetración del
fijador (tamaño molecular)
grosor del tejido (óptimo para
MO es de 0.5 cm; para ME es de
0.5 mm).
proporción volumétrica fijador
versus tejido (óptimo es 20:1)
1.3.2. El pH del fijador es una de
las constantes que la célula debe
mantener dentro de un rango muy
estrecho, ya que de él depende que

Técnica histológica

Se efectúen las funciones vitales(respiración, metabolismo, etc.) en
forma normal. Para obtener una
solución fijadora con un pH
deseado, se utiliza una solución
llamada Buffer o tampón, que tiene
la propiedad de mantener un pH
determinado. Un buffer puede ser
orgánico (acetato o cacodilato de
sodio) o inorgánico (fosfato de
sodio) En la práctica se utiliza un
instrumento llamado pHímetro
para medir el pH de la soluciónbuffer.
1.3.3. La solución fijadora debe
tener una osmolaridad adecuada al
tejido que se estudiará, es decir, la
solución fijadora debe tener una
concentración muy similar a los
líquidos que bañan las células o
tejidos. Esto es muy importante
puesto
que
así
se
evitan
desplazamientos de líquidos de
mayor a menor concentración, que
puedan provocar deformaciones de
la célula. En la...