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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS




DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA
LABORATORIO DE GENÉTICA MICROBIANA

PRÁCTICA N° 3
“Transferencia de material genético por conjugación en Escherichia coli”

GRUPO: 5QV1 EQUIPO: 5 SECCION: 1
INTEGRANTES:
De la Cruz Ricardo
Franco Hernandez Erika Jayet

PROFESORES:

M en C. Verónica Pérez Enríquez
QBP FranciscoEspañol Español
Biol. Sergio Mora Ramírez
Biol. Martha Elena Estera García







FECHA DE ENTREGA: 02 DE JUNIO DE 2015
OBJETIVOS
Cuantificar la transferencia de material genético por medio de conjugación en bacterias Gram (-)
Establecer las diferencias entre las transconjugantes que se obtienen a partir de células donadoras Hfr y F´y con receptoras Rec+ y Rec-
INTRODUCCIÓN
Lasbacterias no sólo pueden pasar sus genes a su descendencia, sino también lateralmente, es decir a otros microorganismos de la misma generación. Esto se conoce como transferencia genética horizontal y se puede producir de varias maneras, una de ellas, la conjugación.
La conjugación (descubierta en 1946 por Joshua Lederberg y Edwars Tatum) es un proceso de trasferencia de información genética de unacélula donadora a una célula receptora en el cual existe contacto entre las superficies de las células. Favorece la variabilidad genética y la evolución; además explica el aumento de bacterias con resistencia a agentes microbianos.
Descripción del plásmido F y sus funciones básicas.
El factor responsable de la fertilidad de E. coli, o sea, el plásmido F, es un ejemplo de plásmido conjugativo que tienela capacidad de interaccionar con el cromosoma bacteriano para integrarse en él (episoma). El factor F puede encontrarse en uno de tres posibles estados:
Autónomo, en las células F+.
Integrado (como episoma), en las células Hfr.
Autónomo, pero con un trozo de cromosoma bacteriano, en las cepas F'.
En cualquiera de estos tres estados realiza el mismo tipo de funciones esenciales.
Estructura físicadel plásmido F:
ADN circular de cadena doble, cerrado covalentemente.
Superenrollado negativamente (requiere la acción de la girasa).
Tamaño: 100 kilobases. El mapa físico de F posee coordenadas en kb de 0 a 100 (obviamente el 0 y el 100 son el mismo punto), tomando como punto arbitrario de referencia (0/100) el borde izquierdo de la secuencia de inserción IS3a.



Organización genética yfuncional
Se han identificado unos 60 genes en el plásmido F que se dividen en:
Porción tra: (genes que codifican funciones relacionadas con la transferencia conjugativa). Existen unos 25 genes tra, repartidos en unas 33 kb (o sea, casi la tercera parte de F está dedicado a genes de conjugación). La mayor parte de esos genes están formando parte del operón Y que contiene aproximadamente unos 20 genes.Los genes tra se pueden clasificar en:
A. Necesarios para la biosíntesis y ensamblaje de los pili. Entre ellos está el gen traA, que codifica la pre-propilina, es decir, el precursor que por maduración se convertirá en la pilina F, la proteína constitutiva de los pili sexuales de tipo F. Otros genes tra intervienen en la maduración de la pilina, y en el ensamblaje de las subunidades del pili.
B.Estabilización de los agregados de conjugación: traG, traN.
C. Metabolismo del ADN durante la conjugación: traI, traD, traM, traY, traZ.
D. Regulación genética de la transferencia: traJ determina un activador transcripcional del gran operón tr; finP, finO formarían un sistema de control negativo sobre el gran operón traY, pero este sistema no es funcional en el plásmido F debido a que el finO tieneuna inactivación insercional permanente por la secuencia de inserción IS3.
E. Exclusión de superficie: traS, traT.
Las células receptoras son denominadas F-, estas pueden clasificarse en Rec+ o Rec- dependiendo de si poseen el gen rec A. Por otro lado, las células donadoras presentan un plásmido (material extracromosómico generalmente de doble cadena, circular y covalentemente cerrado) sexual...