00Medios Bioquimicas

UNIVERSIDAD DE SONORA
DIVISIÓN

DE

CIENCIAS BIOLÓGICAS

Y DE LA

SALUD

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS

Medios de Cultivo y Pruebas Bioquímicas

Microbiología General
Grupo 01
2015-1

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Microbiología General

Medios y pruebas bioquímicas

2015-1

CONTENIDO
MEDIOS DE CULTIVO
Agar Nutritivo
Agar Sangre / Agar Chocolate
Agar Salmonella Shigella
Agar Mueller Hinton
Agar EMB
Agar ENDOAgar Lowenstein Jensen

1
5
9
13
17
21
25

PRUEBAS BIOQUÍMICAS
CAMP
Urea
Rojo de Metilo
Descarboxlación de Aminoácidos
Kliger
DNAsa
Catalasa
Peroxidasa
Motilidad

29
33
37
41
48
52
56
60
64

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Medios y pruebas bioquímicas

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Agar Nutritivo
Pablo Espriu Martínez, Ana Lucia González Soto, Ivanna Rovira Celayo
Antecedentes
El caldo de cultivo consiste en agua, extracto decarne y peptona. Peptona es una mezcla de nitrógeno de
fuentes animales y vegetales. Luego se le agrega agar para convertir la mezcla en sólido, y en ese estado se
denomina agar nutritivo.
Es un medio muy generalista, así es muy empleado para el crecimiento de microorganismos exigentes y
no exigentes. Asimismo, anotamos como los Clostridium y anaerobios adquieren crecimiento igualmente en
elmomento que se incuban bajo condiciones de anaerobiosis.
El agar nutritivo es considerado un medio de cultivo común ya que son aquellos que poseen los
componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten
requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que
resulta de la adición de agar al caldo nutritivo.Fundamento
Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco
exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La peptona
es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite
el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar elcultivo de microorganismos
exigentes.
Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales
de importancia sanitaria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativas altas temperaturas.
Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las
colonias pequeñas.

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Mediosy pruebas bioquímicas

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Preparación
Primeramente se mesclan los reactivos utilizados después los disolvemos con agua destilada, para así vaciar
a un matraz y hervirlos agitando para que el medio no se queme, hasta que el agar hierva y este estéril.
Posteriormente colocamos los mecheros para tener el campo desinfectado, en las cajas petri después de
esterilizarlas vaciamos el agar teniendoel agar y las cajas cerca de los mecheros para que estos no se
contaminen, ya vaciados los dejamos enfriar para que el agar se coagule y así poder sembrar la muestra
contaminada.
Para preparar cultivo en superficie, se toma la muestra y se inocula directamente la muestra por estría.
Se Homogeneiza mediante movimientos de vaivén y rotación, dejar solidificar. En caso de realicemos el
cultivo enprofundidad se inocula una alícuota de la muestra directa o de su dilución. Verter un volumen del
medio de cultivo fundido y enfriado a 40-45°C.
La incubación en tiempo, temperatura, y la atmósfera de incubación, dependerán del microorganismo
que se quiera recuperar. En general se recomienda: Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a 35-37oC
durante 18 a 24 horas.

Interpretación deResultados
Es importante hacer una coloración de Gram sobre las colonias presentes para garantizar la pureza del
cultivo. El producto final tiene un cuidadoso control para asegurar que cada lote llene las especificaciones
del medio: Color, consistencia, tersura, esterilidad, pH.

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Ejemplos de microorganismos

Colonias de Bacillus sp en agar...