1 Métodos De Detección Y Cuantificación De Microorganismos

1 MÉTODOS DE DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS
METODOLOGÍA DE ESTUDIO
Ya que los microorganismos son invisibles al ojo humano, debemos realizar una serie de pruebas para detectarlos. Cada determinación consta de 3 fases:
* Toma de muestras
* Procesado de las muestras
* Medición (detección e identificación, recuento, biomasa, actividad metabólica)
Finalmente, hay queinterpretar los resultados obtenidos en base a la información de la que disponemos.
BASES METODOLÓGICAS
* Conocer la biodiversidad microbiana y su actividad en un hábitat determinado.
* Procesos integrados: en primer lugar hay que plantear todo el proceso de análisis que se va a seguir. Por ejemplo, los procesos de aislamiento, identificación y recuento de un determinado microorganismopueden hacerse todos en un mismo paso (siembra en estría en un medio selectivo).
* Muestreo representativo que debe reflejar la diversidad y densidad microbiana.
* Problemas:
* Distribución heterogénea de los microorganismos (diseño del muestreo).
* Muestras simples o muestras compuestas: espacio, tiempo, microhábitats, estadística, etc. Por ejemplo, una población demicroorganismos en un hábitat determinado puede experimentar variaciones a lo largo del tiempo en función de la temperatura y/u otras variables, que pueden ser de interés.
RECOGIDA O TOMA DE MUESTRAS
Los microorganismos están presentes en cualquier lugar, así que no hay una única forma de recogerlos, sino muchas diferentes en función del medio que nos interese muestrear. La muestra tomada debe serrepresentativa y en ningún caso podemos introducir ningún microorganismo ni modificar las condiciones de forma que variemos la actividad microbiana o provoquemos un aumento o un descenso en la densidad de población; por este motivo, la esterilización previa del material que vayamos a utilizar y el trabajo en condiciones de asepsia son fundamentales para evitar los riesgos de contaminación microbiana.
Elsistema de muestreo que se va a seguir se determina en base a:
* Propiedades físico-químicas del medio (agua, suelo, animal, planta).
* Abundancia esperada de microorganismos (varía en función de las condiciones ambientales, de la actividad humana, del nivel de higiene, etc.).
* Procedimiento de recuento o medida a realizar. Por ejemplo, la actividad microbiana es mejor medirla in situ oen el menor tiempo posible.
La distinta procedencia de las muestras (ecosistemas) determina el método de muestreo a emplear:
•Agua: botellas estancas, mallas o redes. El agua tiene mucha microbiota propia y es muy importante no contaminarla durante el muestreo (esterilización de grifos, etc.). Las botellas estancas evitan el crecimiento de los microorganismos, pero presentan un graninconveniente que se conoce como “efecto botella”. Este fenómeno consiste en que los nutrientes, que inicialmente se encontraban dispersos en la columna de agua, se adhieren y se concentran en las paredes de la botella, convirtiéndose en importantes puntos nutricionales a los que migran las bacterias, que aumentan en gran medida su velocidad de crecimiento. Esto nos puede dar un resultado falso, por lo quese suele añadir un conservante para evitar el crecimiento.
Existen diversos dispositivos para realizar muestreos en profundidad o en superficie, en lagos o en el medio marino, con botellas (rosetas), mallas o redes.
•Aire: se filtra un volumen conocido a través de un filtro de tamaño de poro adecuado (en función de lo que queramos muestrear), que se incuba luego en un medio genérico o selectivo.Este tipo de muestreo se realiza succionando y forzando el aire a través del filtro, con lo que conseguimos concentrar los microorganismos de muchos litros de aire en un filtro de unos pocos centímetros cuadrados de superficie. Hay que tener en cuenta que el aire no tiene microorganismos propios, así que todos los que detectemos procederán de otros sitios (corrientes de aire que levantan...