10 Aislamiento De Bacterias

Práctica # 6

AISLAMIENTO Y CULTIVO DE MICROORGANISMOS

1.- INTRODUCCIÓN
En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como poblaciones mixtas, pero si se quieren estudiar, caracterizarlos e identificarlos, se requiere tenerlos como cultivos puros ó axénicos.
Un cultivo puro es aquel que contiene un sólo tipo de microorganismo que procede de una sola célula, lasbacterias al estar en un medio sólido y crecer en él da lugar a una masa de células fácilmente visible que recibe el nombre de colonia. Las colonias obtenidas en el medio de cultivo reúnen una serie de características típicas para cada microorganismo. Cada uno de los cultivos puros que componen una especie se denomina cepa.
Para obtener cultivos axénicos o puros a partir de una población microbianamixta, se utilizan las denominadas técnicas de aislamiento. En todo estudio microbiológico, el primer paso es la separación de la población mixta a un cultivo puro y luego su posterior identificación (familia, género, especie).


2.- PRINCIPIO Y METODOLOGÍA DE LA DETERMINACIÓN
Se entiende por aislamiento, al proceso que permite separar uno o más microorganismos presentes en un sustrato, forzándolosa crecer en medios de cultivos artificiales. No todos los microorganismos pueden cultivarse en medios artificiales, es el caso de los organismos biotróficos (parásitos obligados), sólo se desarrollan sobre tejido vivo de su hospedante (Rickettsias, etc.).

El aislamiento de bacterias en medios artificiales permite obtener diferentes tipos de colonias correspondientes a los diferentesmicroorganismos presentes en la población original. No obstante, para llevar a cabo su estudio, es necesario separar unos de otros y trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos puros.
La obtención de un cultivo puro, a partir de una población mixta, se lleva a cabo en dos etapas:
1. La muestra debe diseminarse de manera tal que los diferentes microorganismos queden lo suficientemente separados sobrela superficie de un medio de cultivo sólido, de manera que luego de la incubación ellos formen colonias visibles aisladas (aislamiento).
2. Luego de tener las colonias aisladas, éstas deben transferirse con el asa a un medio para cultivar esa colonia aislada; este procedimiento se conoce como resiembra.
Para garantizar la pureza del cultivo obtenido, es conveniente, a partir de cada tipo decolonia aislada, repetir el proceso de aislamiento. Se considerará que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al realizar este procedimiento, todas las colonias obtenidas presenten las mismas características. El medio de cultivo utilizado en el e aislamiento dependerá, entre otros factores, de los requerimientos nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la presencia demicroorganismos que, por sus características y/o por la cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la obtención del microorganismo objeto del aislamiento. En este último caso, se deben utilizar medios de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de gérmenes contaminantes. La temperatura y otras condiciones de incubación, variarán según los microorganismos, usualmente latemperatura óptima de los microorganismos patógenos para el hombre oscila entre 30 y 40ºC. Cuando el microorganismo que se intenta aislar es anaeróbico, deben tomarse las precauciones necesarias a fin de eliminar la presencia de oxígeno en el ambiente donde se desarrollará el mismo. La colonia microbiana obtenida después de cultivarlas también es llamada unidad formadora de colonias (UFC) debido a queestá constituida por individuos de la misma especie provenientes de una célula o un grupo de ellas.
Las especies bacterianas se pueden identificar basándose en el aspecto que tienen al desarrollar en los diferentes medios. La pigmentación, el tamaño, la forma, borde, elevación, superficie, aspecto, luz transmitida o reflejada, consistencia, producción de pigmento, son indicadores importantes...