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XVII CONCURSO UNIVERSITARIO FERIA DE LAS CIENCIAS

CARÁTULA DE TRABAJO

Biología
Área

Externa
Categoría

Investigación Experimental
Modalidad

"Regulación de la expresión genética de las
proteínas verde fluorescente y betalactamasa a través de la inserción del
plásmido pGLO en la bacteria E. coli como
mecanismo de resistencia a la ampicilina."
Título del trabajo

Aequorea victoria
Pseudónimo deintegrantes

ÍNDICE

1 
 

ÍNDICE
Abreviaturas……………………………………………………………………………….. 5
Resumen …………………………………………………………………………………….7
Marco Teórico
•

Ingeniería Genética…………………………………………………………………………………8

•

Clonación de genes………………………………………………………………………………..10

•

Secuencia de ADN…………………………………………………………………………………10

•

Reacción en cadena de polimerasa………………………………………………………10

•

Biotecnología……………………………………………………………………………………….11

•

Animales transgénicos………………………………………………………………………… 11

•

Plantas transgénicas…………………………………………………………………………… 11

•

Bacterias transgénicas………………………………………………………………………… 12

•

Transformación bacteriana………………………………………………………………… 12

•

GFP: proteína verde fluorescente ……………………………………………………… 13

•

Genética Bacteriana…………………………………………………………………………… 14

•

Plásmidos…………………………………………………………………………………………… 16

•Regulación de la expresión genética……………………………………………………18

•

Beta-lactamasa y su resistencia a la Ampicilina………………………………… 19

•

Regulación del operón de la L-arabinosa en E. coli……………………………..20

•

Estudios de transformación de E. coli con plásmidos………………………….22

Planteamiento del problema…………………………………………………………25
Objetivo General…………………………………………………………………………27
ObjetivosEspecíficos……………………………………………………………………27
Hipótesis……………………………………………………………………………………27
Material y Métodos…………………………………………………………………… 28
•

Material……………………………………………………………………………………………… 28
Accesorios……………………………………………………………………………………… 28

•

Métodos
Consideraciones previas…………………………………………………………………….29.
Consideraciones de seguridad ……………………………………………………………29
Preparación del Agar…………………………………………………………………………29
2 

 

Preparación de la arabinosa y ampicilina……………………………………… …30            Identificación de las placas ……………………………………………………………….30

Almacenaje de placas ……………………………………………………………………….31
Transformación bacteriana……………………………………………………………… 31
Preparación de plásmidos pGLO……………………………………………………… 33
Transformación en el laboratorio …………………………………………………….33
Resultados

. ………………………………………………………………………… 39

Observaciones de los cultivos de origen.Determinación del pre-fenotipo….. 39
Observaciónes de latransformación genética de E. coli……………………………… 40
Eficiencia de la transformación…………………………………………………………………… 41
1. Cálculo total del número de colonias fluorescentes………………………. 41
2. Determinación de la cantidad de plásmido pGLO
en el cultivo LB/amp/ara…………………………………………………………………….42
Análisis de Resultados……………………………………………………………… 45
Conclusiones…………………………………………………………………………….49Referencias………………………………………………………………………………51
Apéndices.
Apéndice A
Medios, soluciones y material biológico empleado………………………………………55
Apéndice B
Glosario de términos…………………………………………………………………………………….56
Apéndice C
Fotografías……………………………………………………………………………………………………58

3 
 

ABREVIATURAS

4 
 

ABREVIATURAS EMPLEADAS
A: Adenina
ADN: Ácido Desoxirribonucleico
Amp: ampicilina
araBAD: arabinosa BAD (genes BAD)
araC: arabinosa C
ARN: Ácido ribonucleico
ATP:Adenosín Trifosfato
Bla: Beta-lactamasa
C: Citosina
CaCl2: Cloruro de Calsio
E. coli: Escherichia coli
EcoRI: E. coli endonucleasa de restricción 1
G: Guanina
GFP: Proteína Verde Fluorescente
LB: Luria and Bertani (medio de cultivo)
Mg: Magnesio
Ori: Origen de replicación
pBAD: Promotor BAD
PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa
pGLO: plásmido GLO
T: Timina
UV: Ultravioleta

5 
 

RESUMEN

6 
 Regulación de la expresión genética de las proteínas verde fluorescente y betalactamasa a través de la inserción del plásmido pGLO en la bacteria E. coli como
mecanismo de resistencia a la ampicilina
RESUMEN
Un gen es un pedazo de ácido desoxirribonucleico (ADN) el...