2 Procesamiento de tejidos

PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
DRA.MARTHA LETICIA ZAMUDIO
AGUILAR
2013 UV FAC.MEDICINA

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
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MATERIAL
FIJACIÓN
MUESTREO
DESHIDRATACIÓN
INCLUSIÓN EN PARAFINA
CORTES
COLORACIÓN O TINCIÓN

CONSERVACIÓN DE TEJIDOS
• CÉLULAS (Membrana, citoplasma y núcleo):
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SALES
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PROTEÍNAS,(ENZIMAS)
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HIDRATOS DE CARBONO
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LÍPIDOS
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ÁCIDOS ORGÁNICOS

MUESTREO DEL TEJIDO
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DESCRIPCIÓN MACROSCÓPICA:
TAMAÑO,
PESO,
FORMA,
COLOR,
TEXTURA,
CONSISTENCIA
ETIQUETAR LA MUESTRA

FIJACIÓN DEL TEJIDO
• TRATAMIENTO DEL TEJIDO CON SUSTANCIAS
QUÍMICAS:
• CONSERVACIÓN DEL TEJIDO
• AUMENTAR LA DUREZA DEL TEJIDO
• IMPIDE PROLIFERACIÓN DE BACTERIAS Y OTROS
GÉRMENES
• EVITAR LA MUERTE CELULAR O AUTÓLISIS
• MANTENER LA ESTRUCTURA CELULAR (preservar
morfología y composición química)AGENTES FIJADORES
• FORMOL AL 10%
• GLUTARALDEHIDO: ME
• BOUIN: ÁCIDO PÍCRICO + FORMOL+ÁCIDO
ACÉTICO (MÉDULA ÓSEA Y TESTÍCULO)
• ALCOHOL 96° (FROTIS Ó CITOLOGÍAS)

REGLA DE ORO PARA LA FIJACIÓN
• RAPIDEZ
• GROSOR DE LA MUESTRA (El formol penetra
4mm en 24 hs, lo que esté más profundo se
autolisa)
4mm
4mm

PROCESAMIENTO HISTOLÓGICO
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DESHIDRATAR EL TEJIDO:
ALCOHOLES Ó ACETONAS
70% (1hora) , 96% (2 cambios, 1h c/u) ,
99% (2 cambios, 1 h c/u)
XILOL (ACLARAMIENTO): prepara la entrada de
parafina (2 cambios, 1h c/u)
• IMBIBICIÓN EN PARAFINA (2 CAMBIOS, UNA
HORA C/U)

PROCESAMIENTO HISTOLÓGICO
La base de todo: obtener cortes delgados (3-5µ). Para eso se requiere:
Contacto firme y uniforme entre cuchilla
y muestra: tejidos blandos se mueven al
contacto: corte disparejo.
Endurecer eltejido
Fijarlo en formol
Dureza
insuficiente
Embeberlo en
parafina
Cortes en
parafina fría:
microtomo
convencional

Sostener
firmemente
tejido y cuchilla
Soporte
metálico
Congelarlo: Corte por
Tejido incluido en un
congelación (microtomo
cubo de parafina: el
refrigerado: criostato)
“bloque”
Técnica difícil,
Usar un molde, poner
Cortes gruesos (8-10µ)
parafina líquida (56-58°C)
Dx provisionalSumergir tejido
hasta el fondo
Dejar solidificar y sacar
Poner en la mordaza del microtomo y
cortar a 3-5µ

INCLUSIÓN EN PARAFINA
Fuente de
Inclusión
de parafina

Depósito de parafina
Tecla para liberar
parafina
Salida de parafina
Área para
molde/Placa caliente
Placa fría

CORTES TISULARES
• CORTES DELGADOS(3-5
MICRAS)
• MICROTOMO:
• CONTACTO FIRME Y
UNIFORME DEL TEJIDO
• CUCHILLA
• BLOQUE DEPARAFINA
• MORDAZA METÁLICA
• PALANCA DE AVANCE

CORTES POR CONGELACIÓN
• CRYOSTATO.
• SE OBTIENEN CORTES
RÁPIDOS PARA
DIAGNÓSTICO
INTRAOPERATORIO.
• GELATINAS EN LUGAR
DE PARAFINA

IMBIBICIÓN EN PARAFINA
Los tejidos tienen agua: son insolubles en parafina (solvente no
polar) Deshidratar para embeber en parafina

BUENA IMAGEN

Evitar colapso deformante
(procesamiento lento)

Facilitar entrada deparafina

BUENOS CORTES

Sumergir en líquidos que
absorben agua (alcoholes
y acetona)

Todos los espacios
internos del tejido
ocupados por parafina

DELGADOS: la luz los
atraviesa y no hay
células encimadas

Proceso ascendente:
70°-80°-96°-99° 1h c/u

Rodear con parafina
(colocar en el molde)

HOMOGÉNEOS: Toda
la extensión es de un
solo grosor
ESTIRADOS: No hay
arrugas, ni dobleces,
ni compresión

Alfinal: tejido sin agua,
espacios vacíos donde
había agua

Al final: Bloque de
parafina con tejido

Introducir solvente en
esos sitios (xilol)

Tejido endurecido, protegido por parafina,
deshidratado, relleno de parafina (embebido)

TINCIONES COMUNES
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HEMATOXILINA Y EOSINA (H y E)
TINCIÓN DE PAPANICOLAOU
AZUL DE TOLUIDINA
Encaminadas a mostrar citoplasmas y núcleos
sin enfocarse encomponentes específicos.
• Uso general

TINCIÓN DE HEMATOXILINA Y EOSINA
• ELIMINAR PARAFINA (calor y xilol)
• REHIDRATAR EL TEJIDO:
• GRADUACIONES DECRECIENTES DE ALCOHOL
HASTA LLEGAR A 100% AGUA

TINCIONES
Los tejidos IMPORTANTE DELGADOS son transparentes
Lograr contraste
NÚCLEO/CITOPLASMA)
HEMATOXILINA Y EOSINA
Colorantes solubles en agua
(el tejido rebanado no tiene
agua TIENE PARAFINA

TINCIÓN...