3
Electroforesis Capilar Agilent 7100
Análisis de Iones mediante
ell nuevo sistema
i t
de
d
Electroforesis Capilar 7100.
U alternativa
Una
lt
ti Rápida,
Rá id
Eficaz y Versátil
Nueva Agilent 7100-CE
Fundamentos de la Electroforesis Capilar (CE)
Si-O- + H+
Si-OH
-4
EOF
2
u x 10 (cm /Vs)
4
Silica
3
2
1
3
5
4
6
7
pH
8
Flujo
jElectroosmótico ((EOF):
)
pH’s básico incrementa EOF
-
-
-
-
-
+
+
+
EOF
+
+
+
+
+
-
-
ÁNODO
-
-
+
+
+
+
-
-
-
+
-
- +
- - + + +
CÁTODO
+
+
ÁNODO
+
+
-
pH ÁCIDO
+
-
+
- - +
- +
+
+
+
EOF
+
+
+
+
- +
+
- +
- -
CÁTODO
pH BÁSICO
Elevada Eficacia de separación gracias al perfil de flujo plano del EOF
Pág. 2
Nueva Agilent 7100-CE
Fundamentos de laElectroforesis Capilar (CE)
FLUJO IONES = FLUJO ELECTROOSMÓTICO (EOF) + FLUJO ELECTROFORÉTICO (EPF)
+
+
+
EPF
EPF
EPF
EOF
EPF
EPF
-
CÁTODO
EOF
EOF
EOF
Adicionando [tensoactivos catiónicos]
-
EOF
neutras
ÁNODO
EOF
DETECTOR
- no se detecta
-
DETECTOR
Señal
ELECTROFORETOGRAMA
neutras
+ +
- -
Adicionando [tensoactivos iónicos]
>CCM se podrán también separarlas
especies neutras.
neutras (modalidad MEKC)
Tiempo
0
Pág. 3
Nueva Agilent 7100-CE
Modalidades, Aplicaciones y Detección UV/VIS
Indirecta
Modalidades: CZE, MEKC (neutros), CGE (sep. por tamaño), CIEF (sep. por pI), ITP, (preconcentr.)…
Aplicaciones:
S ll Molecules
Small
M l
l
Cation /Anion analysis
Large Molecules
Proteins, e.g.
Antibodies
Small
S
ll Molecules
M l
l
Polar compounds,
e.g. basicdrugs
Small Molecules
Natural products in
complex matices
Large Molecules
Peptides & peptide
map
Large Molecules
xNA and
Oligonucleotides
Small Molecules
Chiral analysis
Large Molecules
Molecule interactions
e.g. Protein-DNA
¿Cómo Detectar por UV/VIS Analitos SIN Cromóforo?
DETECTOR
SEÑAL
DETECCIÓN UV/VIS INDIRECTA
Permite la detección por UV/VIS de
analitos que NO absorben. Utiliza untampón que absorbe a la long. onda de
t b j ((pero sin
trabajo
i saturar
t
all d
detector).
t t )
Muy utilizada para Análisis de
Aniones y Cationes:
X mUA
0 mUA
X mUA
0 mUA
Pág. 4
Nueva Agilent 7100-CE
Análisis de Aniones con Inversor EOF e
Identificación Rápida de Aniones con DAD
Tampón Aniones Agilent
Brr
10
8
(p/n:8500-6797)
H2PO4
F
NO3
NO2
Cl
SO4
DAD1 A, Sig=350,80 Ref=245,10(DEMOIONS\ANIONS10.D)
mAU
12
245 nm
6
(ajustado a pH:8.2)
10 ppm aniones
Cap : 50µm/ ll.efec.=
Cap.:
efec = 40cm -BF
BF3
Temperatura: 40ºC
Voltaje: -30KV
Inyec: 200 mbars·seg
4
2
0
1.5
2
2.5
3
3.5
4
min
i
4.5
NO2 y NO3 absorben a
220nm ((el resto no))
Br
B
10
1515
10
RELACIÓN ALTURAS*
H2PO4
20
F
NO2
mAU
NO3
Cl
SO4
DAD1 B, Sig=350,80 Ref=220,10 (DEMOIONS\ANIONS10.D)
(en escalanormalizada con respecto a
un anión transparente)
NO2: 210nm ~ 220 ~ 245/2
NO3: 210nm<<220 ~ 245/2
Br: 210nm ~60% (220 ~ 245)
220 nm
5
0
25
-5
1.5
2
2.5
3
3.5
4
min
4.5
Transparentes (Cl,SO4,F,
H2PO4,...)) 210nm = 220 = 245
F
H2PO4
20
NO3
NO2 , NO3 y Br absorben
a 210nm (el resto no)
Br
30
10
20
15
25
NO2
Cl
SO4
DAD1 C, Sig=350,80 Ref=210,10 (DEMOIONS\ANIONS10.D)
mAU
mAU
15105
210 nm
50
-5
0
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
* Valores utilizando Tampón Aniones Agilent (p/n:8500-6797)
Áreas *
Áreas *
220nm/ 245nm
210nm/ 245nm
Transpa
Transparentes
24
2.4
30
3.0
Br
2.3
1.8
NO2
1.1
2.0
NO3
11
1.1
02
0.2
Aniones
min
Page 5
Nueva Agilent 7100-CE
Análisis de Iones
Análisis rápidos en
matrices complejas con
mínima preparación de
muestra
(frecuentemente sólodisolver)
Agilent dispone de una amplia gama de
Kits, Reactivos y métodos para lograr
mayor eficacia
fi
i en ell laboratorio,
l b
t i por ej.
j
para Aniones, Cationes (incluyendo de
cationes de transición), ácidos orgánicos,…
Datos tomados de Página 98
CE-Primer: P/N 5990-3777EN
Page 6
Nueva Agilent 7100-CE
Sistema de Electroforesis Capilar Agilent 7100
hv
Capilares
tipo
“Burbuja”
Cassette...
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