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AGAR UREA DE KRISTENSEN

Principio:
Determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar la urea en dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa, con la resultante alcalinidad.

Objetivos:
A. Desde el principio esta actividad enzimática fue característica de todas las especies Proteus y se la utilizó sobre todo para diferenciar los microorganismos proteusrápidamente ureasa positivos de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae; los otros géneros pueden dar una reacción positiva tardía.
a. Proteus (por lo común + y rápida)
b. Providencia ( V, variable; por lo común -)

B. Ayudar a la diferenciación de especies
Ureasa de Kristensen
a. Enterobacter dissolvens (+), E. gergoviae(+), E .hormaechae(V, por lo comun+), E. cloacae(V), E. absuriae (V, por lo comun+), de otras especies Enterobacter (-).
b. Klebsiella ornithinolytica (+), K. oxytoca (+) K. planticola(+), K. pneumoniae subesp. Pneumoniae (+) de o otras especies Klebsiella (-).

C. Ayudar a la identificación de
1. Vibrio parahaemolyticus ureasa variable, por lo común +.
2. Helicobacter cinaedi rápidamente ureasa +.
3. Especies demycobacterium (V).
4. Especies de Cryptococus (levaduras) (+1-2 días).
Bioquímica:

El sustrato urea, una diamida del acido carbónico, a menudo se designa como una carbamida. Todas las amidas son hidrolizadas con facilidad. La urea es hidrolizada por una enzima específica, la ureasa o urea amidohidrolasa, para dar dos moléculas de amoniaco. En solución, la urea se hidroliza a carbonato de amoniocomo producto final.

La ureasa es una importante enzima microbiana relacionada con la descomposición de los compuestos orgánicos. Las enzimas bacterianas se clasifican como constitutivas o adaptativas. Una enzima adaptativa o inducida se produce solo cundo su sustrato especifico está presente. La ureasa es considerada constitutiva debido a que es sintetizada por ciertas bacterias sin tomar enconsideración la presencia o la usencia de su sustrato, la urea.

Existen dos amplias divisiones de enzimas: a) hidrolasas, ya que están relacionadas con la hidrólisis de esteres, hidratos de carbono, proteínas, y amidas, y b) aquellas relacionadas con aquellas reacciones de oxidación-reducción. La ureasa se clasifica como una amidasa, ya que cataliza la hidrólisis de las amidas. Oppenheimerincluyo entre las amidasas a todas las enzimas que pueden romper los puentes entre el nitrógeno y el carbono por hidrólisis.

En el caso de la ureasa, el nitrógeno es disociado como amoniaco (NH3). La ureasa actúa en los compuestos a nivel de los puentes C-N excepto en aquellos que contienen puentes peptidicos. El pH óptimo para l actividad de la ureasa es 7.

Interpretación:

Agar con urea deKristensen
1. Positivo (+): color rosa-rojo (rojo violeta) intenso en el pico de flauta. El color puede penetrar en el interior del agar; la extensión del color indica la velocidad de la hidrólisis de la urea.
a. Grado de hidrólisis
(1) 4+; todo el tubo rosa-rojo.
(2) 2+; pico de flauta rosa, fondo sin cambios
(3) + débil; la parte superior del pico de flauta rosa, el restosin cambios.
b. Positivo rápido: 1-6 h para todos los microorganismos Proteeae positivos.
c. Positivo tardío : 24 h a 6 días de incubación o mas

2. Negativo (-): sin cambios de color (color piel a amarillo pálido).

PRUEBAS CON AGAR HIERRO DE KLIGLER Y AGAR HIERRO TRIPLE AZÚCAR
Principio:
Determinar la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono específicoincorporado en un medio de crecimiento básico, con producción o no de gases, junto con la determinación de posible producción de ácido sulfhídrico.
Objetivo:
a) La producción de ácido sulfhídrico y/o las formas de fermentación so generalmente características de los grupos, géneros o especies bacterianos específicos, sobre todo entre las Enterobacteriaceae.
1. Ácido/ácido, con/sin gas.
A. AHK...