5 Tecnicas De Inmunologia

- GUIA DE TECNICAS INMUNOLOGICAS 2004 -

INTERACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO La unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una interacción reversible en la que están involucrados enlaces no-covalentes. En la interacción in vitro de un antígeno (Ag) con su correspondiente anticuerpo (Ac) se distinguen dos etapas, la interacción primaria no visualizable y la interacción secundaria, que sigue a la anteriory se caracteriza por la aparición de un fenómeno visible como la aglutinación o la precipitación. Por otro lado, no siempre que se produce la interacción primaria Ag-Ac, se produce la interacción secundaria, ya que, para conseguir fenómenos visibles, son indispensables determinadas concentraciones y características de los Ags y Acs. Interacción Secundaria Ag-Ac Las técnicas inmunológicas queevidencian la interacción Ag-Ac a través de una reacción secundaria (precipitación ó aglutinación) son, generalmente, más económicas y sencillas que aquellas que permiten visualizar la interacción primaria (ver más adelante). Reacciones de precipitación Al mezclar cantidades suficientes de Ag soluble con Acs específicos, la interacción AgAc puede dar lugar a una red capaz de ser visualizada como unprecipitado. Esa red de la que hablamos, no es otra cosa que grandes complejos inmunes (CI) formados por la interacción Ag-Ac. Tal como se observa en la figura, cuando se agregan concentraciones crecientes de Ag soluble a una cantidad fija de suero conteniendo Acs específicos, a medida que la cantidad de Ag agregado aumenta, la cantidad de precipitado se incrementa hasta alcanzar un máximo, luego delcual declina. En un extremo de la curva de precipitación, cuando se agregan pequeñas cantidades de Ag, los CI se forman en exceso de Ac. En el otro extremo, al agregar grandes cantidades de Ag, los CI se forman en exceso de Ag siendo pequeños y probablemente constituidos por una molécula de Ac y dos de Ag. Entre estas dos situaciones extremas se encuentra la zona de equivalencia, en donde larelación AgAc permite la formación de grandes redes de CI que precipitan.

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Exceso de Ac

Equivalencia

Exceso de Ag

Cantidad de Ag agregado

La reacción de precipitación depende de la VALENCIA del Ac y del Ag. La valencia del Ac da idea del número de sitios que posee para reconocer al Ag. De esta manera, un Ac bivalente posee dos sitios capaces de reconocer al Ag. Del mismo modo, lavalencia de un Ag nos habla del máximo número de epitopes que posee. Para que se pueda producir la interacción secundaria Ag-Ag con la consecuente formación del precipitado, tanto el Ag como el Ac deben ser, al menos, bivalentes.

La asociación entre Ac bivalentes y Ag monovalentes (un único epitope no repetido) no permite la formación de CI precipitantes.

La asociación entre Ac bivalentesmultivalentes permite la formación precipitantes. El Ag multivalente presentar un sólo epitope repetido o epitopes distintos.

y Ag de CI puede varios

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Técnicas inmunológicas basadas en reacciones de precipitación. 1- Inmuno Difusión Radial (IDR) Esta técnica permite cuantificar de manera sencilla y económica inmunoglobulinas de isotipo G, M y A ó antígenos solubles (C3, C4, transferrina,etc) presentes en muestras biológicas. La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el antígeno a medir (inmunoglobulinas ó antígenos solubles) en una matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac específico. La muestra biológica se introduce en los orificios cilíndricos excavados en el agar y a medida que el antígeno difunde en forma radial, se alcanza la relaciónAg-Ac que permite la formación precipitados visibles. Una vez finalizada la difusión se mide el radio (R) de los precipitados que es proporcional a la concentración de antígeno (C). La concentración de proteína en la muestra biológica (Cx) se calcula realizando una curva de calibración utilizando muestras patrones de concentración conocida.

Muestra Biológica de concentracion desconocida (Cx)...