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| INSTITUTO POLITENCNICO NACIONALESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICASINGENIERIA BIOQUIMICAMETODOS DE ANALISISVerificación del funcionamiento de un espectrofotometroPérez Gómez AndrésSECCIÓN 2 4IM2 | |

INTRODUCCION
Para la obtención de resultados confiables empleando métodos espectrofotométricos es necesario verificar el buen funcionamiento del equipo de medición. Para llevar a cabo estascomprobaciones es común el empleo de sustancias estándar, cuyas propiedades espectrales son conocidas, posteriormente se evalúa el funcionamiento en función de los resultados obtenidos, aunque no se han definido claramente los parámetros de que deben valorarse para asegurar un funcionamiento óptimo, se ha acordado evaluar los criterios siguientes para ello:
* Exactitud de la escala de longitudde onda
* Luz dispersa
* Exactitud fotométrica
* Ancho de banda
* Proporcionalidad o linealidad fotométrica

OBJETIVOS
* Evaluar el rendimiento instrumental de un espectrofotómetro
* Verificar la exactitud de escala de la longitud de onda, la presencia de radiación dispersa, el ancho de banda, la exactitud fotométrica, la proporcionalidad de respuesta y el rendimientoglobal del instrumento
RESULTADOS
Picos: 440 nm, 480 nm, 510 nm y 570 nm.
Valles: 460 nm, 490 nm y 540 nm

Coincidieron en casi todos los puntos, excepto en un pico, el de 480 nm está reportado con el fabricante en la longitud de onda de 470 nm
Picos: 440 nm, 480 nm, 510 nm y 570 nm.
Valles: 460 nm, 490 nm y 540 nm

Coincidieron en casi todos los puntos, excepto en un pico, el de 480 nmestá reportado con el fabricante en la longitud de onda de 470 nm
Tabla 1. Espectro de transmisión del filtro de didimio
Longitud de onda (nm) | %T |
400 | 13.2 |
410 | 25.8 |
420 | 38.8 |
430 | 50.6 |
440 | 55.8 |
450 | 51.8 |
460 | 45.2 |
470 | 46.2 |
480 | 46.4 |
490 | 43.8 |
500 | 48 |
510 | 55.4 |
520 | 54 |
530 | 39.4 |
540 | 28.8 |

Tabla 2.Espectro detransmisión de la solución de NISO4∙6H2O al 20 %
Longitud de onda (nm) | %T |
380 | 17.8 |
390 | 6.8 |
400 | 2.8 |
410 | 2.6 |
420 | 3.2 |
430 | 4.4 |
440 | 8 |
450 | 17.2 |
460 | 31.6 |
470 | 43.6 |
480 | 53 |
490 | 64.2 |
500 | 75.4 |
510 | 82.6 |
520 | 85.2 |
530 | 84.8 |
540 | 81.8 |
550 | 79.2 |
560 | 75.2 |
570 | 71.2 |
580 | 66.8 |
590 | 60.8 |
Lalongitud de onda a la cual se obtuvo el mayor %T fue a 520 nm, y en el que se obtuvo el menor fue a 510 nm
La longitud de onda a la cual se obtuvo el mayor %T fue a 520 nm, y en el que se obtuvo el menor fue a 510 nm

Ventajas y desventajas de los métodos empleados en la práctica para estimar la exactitud de la escala de longitud de onda:
Ventajas | Desventajas |
Son patrones que tienenespectros de transmisión y absorción con cresta y valles bien definidos | La longitud de onda es limitada |
Sus espectros de transmisión y absorción se obtuvieron con el mismo ancho de banda que trabaja el espectrofotómetro que se evalúa. |
Sus posiciones se alteran por la anchura de la rendija. |
Filtro de didimio, absorbe energía a diferentes longitudes de onda, presentando picoscaracterísticos y constantes que se toman como valores de referencia. | El manejo de los filtros es delicado y con mucho cuidado de no despostillarlo o tirarlo, debido a que son más costosos que la solución de NiSO4   6H2O al 20%. |
Los filtros (filtro de didimio) evitan distorsiones ópticas debido a la posición | El buen funcionamiento de la solución patrón de NiSO4 6H2O al 20%, dependerá de supreparación, debido a que se pueden cometer errores en la formulación, pesado y en la medición de volúmenes. |

Tabla 3.proporcionalidad entre A y λ para NISO4∙H2Oal 20 %

Longitud de onda (nm) | Absorbancia |
530 | 0.0716 |
540 | 0.0872 |
550 | 0.1012 |
560 | 0.1237 |
570 | 0.1475 |

Se puede concluir que no hay una falla en la fuente de radiación, en el monocromador, en el detector, o...