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CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
INTRODUCCIÓN
Los métodos más usados en la separación de moléculas son la ultracentrifugación, la electroforesis y la cromatografía (Cardella-Hernandez, n.d.). Esta técnica incluye una serie de métodos analíticos de separación que tienen como característica general el de estar constituidos por una fase estacionaria y una fase móvil, entre las que se distribuyendiferencialmente las sustancias a separar. Cuando la fase móvil, la que arrastra a las partículas que se van a separar, es un liquido (solvente o mezcla de solventes) se denomina cromatografía de líquidos. Si la fase móvil es un gas se denomina cromatografía de gases (Gonzales et al, 2008).
La cromatografía en papel (cromatografía en la que la fase estacionaria es papel), es una técnica en la que seaplica un pequeño volumen de la muestra cerca de uno de los extremos de una hoja de papel filtro. Este tipo de cromatografía puede ser ascendente, en la que el papel se sujeta a la parte superior de la cámara y se sumerge en el solvente, que se encuentra en el fondo, entonces el solvente se mueve hacia arriba por capilaridad. Al realizarse la separación, los solutos de la mezcla original migran a lolargo del papel con diferentes velocidades, dependiendo de la solubilidad en el solvente. La relación de migración de una sustancia (Rf) puede expresarse de acuerdo con la siguiente fórmula (Gonzales et al, 2008):
Rf=distancia recorrida por la muestradistancia recorrida por la mezcla eluyenteLa cromatografía es una técnica que permite la separación de moléculas pequeñas como lípidos, nucleótidos,vitaminas, fármacos y aminoácidos; debido a que cada sustancia exhibe un valor Rf particular, es posible separar aminoácidos y péptidos, ya que estos presentan características particulares, de solubilidad, polaridad y tamaño, por la composición química de sus grupos R (Koolman & Roehm, 2005).
OBJETIVO GENERAL
Determinar la presencia de un edulcorante artificial en una muestra problemamediante su Rf, y ver sus propiedades de solubilizacion comparándolo con los Rf de los aminoácidos que los componen.
OBJETIVOS PARTICULARES
Separar aminoácidos y péptidos mediante el uso de la cromatografía en papel.
Determinar el corrimiento cromatográfico de un aminoácido polar y uno no polar, comparando el Rf de cada uno de ellos.
Separar e identificar, por medio de la cromatografía en papel, elaspartame presente en un refresco dietético, comparando su Rfcon el del Canderel.
HIPÓTESIS
Si se utiliza la técnica de cromatografía es posible separar las sustancias en sus componentes esenciales.
MATERIAL Y MÉTODO
Primero, se recortó un rectángulo de papel de whatman con medidas de 20x9cm con guantes de látex puestos para no contaminarlo. Enseguida se coloco encima de un pliego decartulina para su fácil manipulación.
Después, se marcaron seis puntos sobre el papel, los cuales se colocaron a un centímetro de la base del papel y a unos 0.5 cm entre punto y punto, aproximadamente. Posteriormente, en los espacios comprendidos entre cada punto se pusieron las muestras de cinco sustancias diferentes: Fenilalanina, Acido Apartico, Canderel, Refresco Normal (sin colorante) y Refrescode Dieta (sin colorante).
Estas muestras se tomaron con un capilar para cada substancia y se pusieron cinco gotas de cada solución entre cada espacio del papel (entre cada aplicación de las muestras se secaba con una secadora).
Después se coloco dentro de la cámara para cromatografía que tenía una mezcla eluyente de Butanol, Acido Acético y agua, que se encontraba dentro de la campana deextracción con una parrilla magnética con una temperatura de 250C, ahi se dejo por una hora y media aproximadamente.
Después se marcó con un lápiz hasta donde llego la fase móvil en el papel de whatman, enseguida se dispuso a dejar secar dentro de la campana de extracción y con una parrilla eléctrica se mantenía la temperatura deseada.
En el momento en el que se seco se aplico ninhidrina con un...