790635
Páginas: 61 (15031 palabras)
Publicado: 23 de agosto de 2015
DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS VIRUS PATÓGENOS DE CULTIVOS DE
GULUPA (Passiflora edulis Sims) EN LA REGIÓN DEL SUMAPAZ (CUNDINAMARCA)
VIVIANA MARCELA CAMELO GARCÍA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE AGRONOMÍA
Bogotá D.C.
2010
DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS VIRUS PATÓGENOS DE CULTIVOS DE
GULUPA (Passiflora edulis Sims) EN LA REGIÓN DEL SUMAPAZ (CUNDINAMARCA)
VIVIANA MARCELACAMELO GARCÍA
Código: 790635
Trabajo de grado presentado para optar al título de M. Sc. en Fitopatología
Dirigido por:
ÓSCAR ARTURO OLIVEROS GARAY
M.Sc. Ph.D.
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE AGRONOMÍA
Bogotá D.C.
2010
Este es otro paso en mi camino como investigadora. A mi familia, amigos y a cada una de las
personas que me apoyaron y estuvieron a mi lado, muchas gracias.Viviana
TABLA DE CONTENIDO
1.
RESUMEN
1
2.
INTRODUCCIÓN
3
3.
MARCO TEÓRICO
6
3.1. Enfermedades causadas por virus en pasifloras
6
3.1. Principales virus que infectan especies del género Passiflora
9
3.1.1. Potyvirus
9
3.1.2. Cucumber mosaic virus (CMV)
12
3.1.3. Passiflora latent virus (PLV)
13
3.1.4. Passion fruit yellow mosaic virus (PFYMV)
14
OBJETIVOS
15
4.1. Objetivogeneral
15
4.2. Objetivos específicos
15
5.
16
4.
MATERIALES Y MÉTODOS
5.1. Muestreo y recolección de material vegetal
16
5.2. Extracción de RNA
16
5.3. Diseño de primers
17
5.4. Retrotranscripción (RT) y Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
19
5.5. Clonación y secuenciación
20
5.6. Análisis de secuencias
20
5.7. ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)
21
5.8.Inoculación mecánica en plántulas
22
6.
23
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
6.1. Síntomas asociados a infección viral en gulupa
23
6.2. Extracción de RNA
25
6.3. Detección de virus de gulupa mediante RT-PCR
27
6.4. Análisis de secuencias
30
6.5. ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)
38
6.6. Inoculación mecánica en plántulas
40
7.
CONCLUSIONES
43
8.
AGRADECIMIENTOS
44
9.
LITERATURA CITADA45
10. ANEXOS
51
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Virus reportados que infectan especies del género Passiflora.
Tabla 2. Primers evaluados para la identificación de virus en gulupa.
Tabla 3. Detección mediante RT-PCR de virus que infectan gulupa.
Tabla 4. Detección mediante RT-PCR de infecciones mixtas por Soybean mosaic virus y
Cucumber mosaic virus en plantas de gulupa.
Tabla 5. Descripción de losaislamientos evaluados mediante RT-PCR usando los primers CI y
CP para Soybean mosaic virus.
Tabla 6. Distancias genéticas del gen CI en aislamientos de Soybean mosaic virus.
Tabla 7. Comparación de procedimientos de detección de Cucumber mosaic virus.
Tabla 8. Comparación de procedimientos de detección de Potyvirus, Soybean mosaic virus y
Cowpea aphid-borne mosaic virus.
LISTA DE FIGURASFigura 1. Diagrama de la organización del genoma de los virus del género Potyvirus.
Figura 2. Diagrama de la organización del genoma de Cucumber mosaic virus.
Figura 3. Diagrama de la organización del genoma de los virus del género Carlavirus.
Figura 4. Síntomas asociados a infección viral en frutos de gulupa. (a) Manchas verdes en frutos
inmaduros. (b) Manchas anulares en frutos maduros.
Figura 5.Síntomas asociados a infección viral en área foliar de gulupa. (a) Deformación en las
puntas terminales de las ramas. (b) Deformación foliar. (c) Mosaicos foliares y clorosis.
Figura 6. Patrones electroforéticos de RNA de plantas de gulupa que exhiben síntomas
sugestivos de infección viral, obtenidos mediante dos procedimientos de extracción de RNA.
Figura 7. Análisis RT-PCR empleando primersdegenerados para Potyvirus en extractos RNA
obtenidos por dos procedimientos de extracción.
Figura 8. Detección de Cucumber mosaic virus en plantas de gulupa mediante RT-PCR usando
primers específicos.
Figura 9. Detección de Potyvirus mediante RT-PCR usando primers degenerados.
Figura 10. Análisis PCR empleando primers degenerados de Potyvirus para verificar la presencia
del inserto (producto PCR...
GULUPA (Passiflora edulis Sims) EN LA REGIÓN DEL SUMAPAZ (CUNDINAMARCA)
VIVIANA MARCELA CAMELO GARCÍA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE AGRONOMÍA
Bogotá D.C.
2010
DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS VIRUS PATÓGENOS DE CULTIVOS DE
GULUPA (Passiflora edulis Sims) EN LA REGIÓN DEL SUMAPAZ (CUNDINAMARCA)
VIVIANA MARCELACAMELO GARCÍA
Código: 790635
Trabajo de grado presentado para optar al título de M. Sc. en Fitopatología
Dirigido por:
ÓSCAR ARTURO OLIVEROS GARAY
M.Sc. Ph.D.
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE AGRONOMÍA
Bogotá D.C.
2010
Este es otro paso en mi camino como investigadora. A mi familia, amigos y a cada una de las
personas que me apoyaron y estuvieron a mi lado, muchas gracias.Viviana
TABLA DE CONTENIDO
1.
RESUMEN
1
2.
INTRODUCCIÓN
3
3.
MARCO TEÓRICO
6
3.1. Enfermedades causadas por virus en pasifloras
6
3.1. Principales virus que infectan especies del género Passiflora
9
3.1.1. Potyvirus
9
3.1.2. Cucumber mosaic virus (CMV)
12
3.1.3. Passiflora latent virus (PLV)
13
3.1.4. Passion fruit yellow mosaic virus (PFYMV)
14
OBJETIVOS
15
4.1. Objetivogeneral
15
4.2. Objetivos específicos
15
5.
16
4.
MATERIALES Y MÉTODOS
5.1. Muestreo y recolección de material vegetal
16
5.2. Extracción de RNA
16
5.3. Diseño de primers
17
5.4. Retrotranscripción (RT) y Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
19
5.5. Clonación y secuenciación
20
5.6. Análisis de secuencias
20
5.7. ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)
21
5.8.Inoculación mecánica en plántulas
22
6.
23
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
6.1. Síntomas asociados a infección viral en gulupa
23
6.2. Extracción de RNA
25
6.3. Detección de virus de gulupa mediante RT-PCR
27
6.4. Análisis de secuencias
30
6.5. ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)
38
6.6. Inoculación mecánica en plántulas
40
7.
CONCLUSIONES
43
8.
AGRADECIMIENTOS
44
9.
LITERATURA CITADA45
10. ANEXOS
51
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Virus reportados que infectan especies del género Passiflora.
Tabla 2. Primers evaluados para la identificación de virus en gulupa.
Tabla 3. Detección mediante RT-PCR de virus que infectan gulupa.
Tabla 4. Detección mediante RT-PCR de infecciones mixtas por Soybean mosaic virus y
Cucumber mosaic virus en plantas de gulupa.
Tabla 5. Descripción de losaislamientos evaluados mediante RT-PCR usando los primers CI y
CP para Soybean mosaic virus.
Tabla 6. Distancias genéticas del gen CI en aislamientos de Soybean mosaic virus.
Tabla 7. Comparación de procedimientos de detección de Cucumber mosaic virus.
Tabla 8. Comparación de procedimientos de detección de Potyvirus, Soybean mosaic virus y
Cowpea aphid-borne mosaic virus.
LISTA DE FIGURASFigura 1. Diagrama de la organización del genoma de los virus del género Potyvirus.
Figura 2. Diagrama de la organización del genoma de Cucumber mosaic virus.
Figura 3. Diagrama de la organización del genoma de los virus del género Carlavirus.
Figura 4. Síntomas asociados a infección viral en frutos de gulupa. (a) Manchas verdes en frutos
inmaduros. (b) Manchas anulares en frutos maduros.
Figura 5.Síntomas asociados a infección viral en área foliar de gulupa. (a) Deformación en las
puntas terminales de las ramas. (b) Deformación foliar. (c) Mosaicos foliares y clorosis.
Figura 6. Patrones electroforéticos de RNA de plantas de gulupa que exhiben síntomas
sugestivos de infección viral, obtenidos mediante dos procedimientos de extracción de RNA.
Figura 7. Análisis RT-PCR empleando primersdegenerados para Potyvirus en extractos RNA
obtenidos por dos procedimientos de extracción.
Figura 8. Detección de Cucumber mosaic virus en plantas de gulupa mediante RT-PCR usando
primers específicos.
Figura 9. Detección de Potyvirus mediante RT-PCR usando primers degenerados.
Figura 10. Análisis PCR empleando primers degenerados de Potyvirus para verificar la presencia
del inserto (producto PCR...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.