9

Práctica 9
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA PIRÚVICO TRANSAMINASA

Introducción

Las reacciones de transaminación son catalizadas por las aminotransferasas y se llevan a cabo en todos los organismosdurante el metabolismo de aminoácidos. Estas enzimas se encuentran prácticamente en todos los tejidos pero abundan en el corazón, cerebro, riñones, testículos e hígado y en los vegetales durante lamaduración de las semillas. En la reacción enzimática se realiza la transferencia de un grupo amino (-NH2) de un aminoácido a un cetoácido. La transaminasas más abundantes en la naturaleza son: laglutámico-oxaloacética (GOT) y la glutámico-pirúvica (GPT), la cual es también conocida como Alanina aminotransferasa la cual cataliza la transferencia del grupo amino de la Alanina al α-cetoglutarato. Losproductos de esta reacción reversible de transaminación son el piruvato y el glutamato como es presentado en la siguiente reacción:

GPT L-Alanina + α-Cetoglutarato ------> Piruvato + L-Glutamato

En elplasma, la actividad de estas enzimas es indicador de algunas patologías, tales como el infarto o el traumatismo del músculo esquelético, ya que ambos provocan un aumento en dicha actividadenzimática. Para medir cuantitativamente la actividad de la GPT, se mide la cantidad de cetoácido (ácido pirúvico) obtenido durante la reacción. Los cetoácidos reaccionan en forma estequiométrica con la 2,4-dinitrofenilhidrazina, dando lugar a un compuesto café-rojo (2,4-dinitrofenilhidrazona) que tienen un máximo de absorción a 505 nm.

Objetivos
Medir la actividad enzimática de la Alaninaaminotransaminasa en un extracto crudo de semillas de chícharo mediante un método espectrofotométrico.

Determinar parámetros cinéticos, tales como Km y Vmax de la transaminasa extraída de chícharos frescos.Material

1 Centrifuga
6 tubos de centrifuga
1 charola para hielo
15 tubos de ensayo
1 Gradilla para tubos
1 Pipeta graduada de 10 ml
1 Pipeta Pasteur
3 Pipetas de 1 ml
3 Pipetas graduadas de 5 ml
2...