A22v18n2

Rev. peru. biol. 18(2): 261 - 263 (Agosto 2011)
© Facultad de Ciencias Biológicas UNMSM

Optimización del test de micronúcleos en linfocitos
ISSN cultivados
1561-0837

NOTA CIENTÍFICA

Optimización del test de micronúcleos en linfocitos cultivados
usando una metodología de gradiente y frotis
Improving the micronuclei test in cultured lymphocytes by gradient and
cell spreading methodology
ErikaCastillo1,2, María Luisa Guevara-Fujita1 y Ricardo Fujita1*
1 Centro de Genética y Biología
Molecular. Facultad de Medicina
Humana, Universidad de San
Martín de Porres, Alameda del
Corregidor 1531, La Molina, Lima,
Perú. Tel. 511 3652300 anexo 152.
2 Facultad de Ciencias Biológicas,
Universidad Nacional Mayor de
San Marcos
* Autor para correspondencia
Email Ricardo Fujita:
rfujita@rcp.net.pe
EmailErika Castillo:
erikita_cast@hotmail.com
Email María Luisa Guevara-Fujita:
mguevara1@usmp.edu.pe

Resumen
El test de micronúcleos en cultivo de linfocitos es una prueba validada para estudiar mutagenicidad. Consiste
en detectar material nuclear interfásico dañado, producto de fragmentación cromosómica o errores de división
nuclear en 2000 células binucleadas con citoplasma definido. El protocoloestándar deriva de la preparación
citológica de cromosomas de sangre periférica con solución hipotónica, lavados de fijador y goteo de láminas.
Nosotros proponemos modificaciones para mejorar el número y la observación de los micronúcleos. Primero
se purifica linfocitos de glóbulos rojos antes del cultivo, luego de 72 horas, se elimina la solución hipotónica y
los lavados repetidos con fijador, yfinalmente se coloca las muestras en láminas por frotis en vez de goteo.
Con las modificaciones obtenemos mas células binucleadas bien definidas (un promedio de 8 veces más por
lámina) mejorando la eficiencia de este test.
Palabras clave: biomonitoreo humano; Proyecto HUMN; genotoxicidad; citogenética; protocolo.

Abstract
Presentado:
11/01/2011
Aceptado:
19/06/2011
Publicado online: 25/08/2011The micronuclei test in lymphocyte culture is a validated procedure to study mutagenicity. It consists in detecting damaged interphasic nuclear material produced by chromosome fragmentation or nuclear division errors
in 2000 binucleated cells with well defined cytoplasm. Standard protocol derives from blood chromosome
preparation with hypotonic and fixing solutions as well as preparing slides bydropping fixed cells. We modified
the protocol to improve the number and quality of micronuclei. First, lymphocytes are separated from red cells
before culture. After 72 hours, hypotonic and repeated fixer washing steps are eliminated. Cells are put onto
slides by spreading instead of dropping. With these modifications we obtained more (about 8 times per slide)
and better defined binucleated cellsto help micronuclei detection.
Keywords: Human biomonitoring; HUMN Project; genotoxic; Cytogenetic; Protocol.

Los micronúcleos (MN) son corpúsculos citoplasmáticos
esféricos, detectados en interfase, más pequeños y con las mismas
características morfológicas que el núcleo celular; se originan por
pérdida de fragmentos cromosómicos o cromosomas enteros
durante la división nuclear y tienen valor enel diagnóstico de
genotoxicidad. El test de micronúcleos registra sólo las células
binucleadas por bloqueo de la citocinesis con citochalasina B
(CBMN), descartando el conteo de mononucleadas, trinucleadas, tetranucleadas, etc. Este artificio permite determinar qué
células han estado expuestas al mutágeno o sustancia a probar
y han pasado recientemente primera división.
En comparación con el testde micronúcleos, el análisis de
aberraciones cromosómicas en metafases proporciona más detalle del daño (Clouston 2001), sin embargo la complejidad del
análisis cromosómico requiere de personal entrenado y mayor
tiempo para el diagnostico (OECD 2004, Wolstenholme &
Burn 2001). Por otra parte, el análisis de micronúcleos provee
mayor validez estadística ya que se registra miles de células...