ABBOTT tecnologia immassays

Introducción
Tecnología de Inmunoensayos

Q.C. Lucia Elizabeth Saldaña
Sandria.

Objetivos del Entrenamiento
• Definir inmunoensayo
• Definir 4 categorías de metodologías de inmunoensayos
(homogénea-heterogénea, competitiva-no competitiva)
• Describir cuales son los factores que afectan el desempeño clínico
de un inmunoensayo
• Comprender 2 tipos de interferencias que afectan estos ensayos:efecto “hook” y anticuerpos HAMA (anticuerpo humano anti ratón)
• Describir las tecnologías: ICIA, (REA), MEIA, FPIA y CMIA

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Definición de un Inmunoensayo
Es un ensayo o prueba de laboratorio que tiene como base
principal la reacción antígeno-anticuerpo con el fin de
identificar algún tipo de analito y generar un resultadoperceptible.
Componentes básicos:


Muestra con el analito a medir



Complejo Antígeno-Anticuerpo



Superficie que soporta la reacción



Señal que permite medir la reacción

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Definición de un Inmunoensayo
Analito

Antígeno

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Anticuerpos

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Definición de un InmunoensayoAntígeno-Anticuerpo

Anticuerpos policlonales

Anticuerpos monoclonales

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Definición de un Inmunoensayo
Superficie de soporte o “fase sólida”
Perlas
Fondo de placas
Micropartículas
Tubo

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Definición de un Inmunoensayo
Señal que permite medir la reacción
Revela lapresencia del complejo, produce una señal medible (Ag o Ac)
•Radioactiva
•Fluorescente
•Color
•Enzimática

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Definición de un Inmunoensayo
Señal que permite medir la reacción

Anticuerpo marcado

Antígeno marcado

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Inmunoensayos de formato competitivo
El analito compitecon un compuesto “idéntico marcado” (parte del
reactivo, llamado Trazador)

- Concentración de anticuerpo
- Concentración de antígeno
- Concentración del trazador

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Inmunoensayos de formato competitivo
La lectura de señal es inversamente proporcional a su concentración

Es el método de preferencia para moléculas pequeñas:Metabolitos de drogas-Estereoides entre otros

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Inmunoensayos
de
formato
competitivo
Competitivos de 1 paso
(limitante)

Competitivo de 2 pasos
( > sensibilidad)

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Inmunoensayos de formato no competitivo
La lectura de señal es directamente proporcional a su concentraciónEnsayo no competitivo a dos pasos, es el formato
que permite mayor sensibilidad y especificidad

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Inmunoensayos de formato no competitivo
Los ensayos no
competitivos tipo
sandwich se adaptan
para formatos de

+

Y

Fase sólida marcada
con elemento de
captura (Ab)

Analito de la muestra
(Antígeno)

Y Y

Y

Y

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3pasos

Y

Conjugado marcado con
trazador (Ej Enzima)

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Y
Y

Y

2 pasos

Y Y

=
Y

Y

Y

Y
Y

1 paso

Y

Y Y

Y Y

Y

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“Sandwich”
Reacciona con el
sustrato

Inmunoensayos Homogeneos-Heterogéneos

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Interferencia de un Inmunoensayo
Los inmunoanálisis de un sólo paso pueden ser propensosa
interferencias que afectan tanto la sensibilidad como la especificidad


Los inmunoanálisis secuenciales a dos pasos mejoran la calidad de los
resultados


• Efecto de gancho o Fenómeno de Prozona
• Anticuerpos antimurino humanos (HAMA)
(Anticuerpos heterofílicos)
•Otras interferencias...

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Interferencia efecto “hook”
Efecto...