Absoluta Cuantificación De Proteínas De Las Enzimas Del Citocromo P450 Clínicamente Relevantes Y UDP Glucuronosiltransferasas En Masa Proteómica Específica Basada En La Espectrometría
Páginas: 36 (8825 palabras)
Publicado: 6 de octubre de 2015
1/10/2015
Absoluta cuantificación de proteínas de las enzimas del citocromo P450 clínicamente relevantes y UDPglucuronosiltransferasas en masa proteómica e…
Revistas
Descargar PDF
Exportación
Libros
Carrito de compras
Search ScienceDirect
Busqueda avanzada
Journal of Pharmaceutical y Análisis
Biomédica
Volumen 100, noviembre de 2014, páginas 393 hasta 401Absoluta cuantificación de proteínas de las enzimas del
citocromo P450 clínicamente relevantes y UDP
glucuronosiltransferasas en masa proteómica específica
basada en la espectrometría
una,
una,
C. Groër 1,D. Busch 1,M. Patrzyk b,K. Beyer b,A. Busemann b,CD Heidecke
b,M. Drozdzik c,W. Siegmund una,S. Oswald una, ,
Artículos recomendados
Misa análisis proteómico basada en la e…
2013, Toxicología yFarmacología Aplicada
Más
Método de extracción de dispersión en f…
2014, Journal of Pharmaceutical y Análisis Bi…
Más
La cuantificación basada en MS LC-MS /…
2013, Journal of Pharmaceutical y Análisis Bi…
Más
Ver más artículos »
Mostrar más
doi: 10.1016 / j.jpba.2014.08.016
Ayuda
registrarse
Citando artículos (3)
Contenido del libro relacionados
Obtener los derechos ycontenidos
Destacados
• La cuantificación simultánea LCMSMS basado / de 13 enzimas que metabolizan
pertinentes.
• La validación del método integral para todas las enzimas antes mencionadas.
• Aplicación para cuantificar las enzimas en el hígado humano y microsomas
intestinales.
• Los primeros datos de proteínas sobre las enzimas que metabolizan intestinales
por proteómica dirigidos.
AbstractoCitocromo P450 (CYP) enzimas y UDPglucuronosiltransferasas (UGT) son factores
determinantes en la farmacocinética de la mayoría de los medicamentos en el mercado.
Para investigar su impacto en el metabolismo de fármacos intestinal y hepática, hemos
desarrollado y validado métodos de cuantificación de las nueve CYP (CYP1A2,
CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1, CYP3A4 y CYP3A5) ycuatro enzimas UGT (UGT1A1, UGT1A3, UGT2B7 y UGT2B15) que han demostrado
ser de relevancia clínica en el metabolismo de fármacos humano. La cuantificación de
proteínas fue realizada por la proteómica dirigidos utilizando cromatografía líquida con
espectrometría de masas en tándem (LCMS / MS) con base en la determinación depéptidos específicos de la enzima después de la digestión con tripsina utilizando en
cada caso de isótopos estables péptidos marcados como patrón interno. La
cromatografía de los respectivos péptidos se realizó con gradiente de elución usando
una fase inversa (C18) columna (Ascentis ® expreso Péptido ESC18, 100 mm x 2,1 mm,
2,7 micras) y ácido fórmico al 0,1% (FA), así como acetonitrilo con 0,1% FA como fasesmóviles, con un caudal de 300 l / min. La detección MS / MS de todos los péptidos se
llevó a cabo simultáneamente con un método de monitorización de reacción múltiple
programada (MRM) en el modo positivo mediante la supervisión en cada caso tres
transiciones de masa por péptido proteospecific y el patrón interno. Los ensayos fueron
validados según las directrices de bioanalíticos actuales con respecto a la especificidad,linealidad (0,25 a 50 nM), dentro de y entredíadía exactitud y precisión, eficiencia
digestión, así como la estabilidad. Finalmente, el método desarrollado se aplicó con
éxito para determinar la cantidad de proteína CYP y UGT en el hígado humano y
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0731708514004002
1/19
1/10/2015Absoluta cuantificación de proteínas de las enzimas del citocromo P450 clínicamente relevantes y UDPglucuronosiltransferasas en masa proteómica e…
microsomas intestinales. El método se demostró poseer suficiente especificidad,
sensibilidad, exactitud, precisión y estabilidad para cuantificar CYP humana
clínicamente relevante y enzimas UGT.
Gráficamente abstracto
Opciones Figura
Palabras clave
LCMS / MS;La cuantificación de proteínas;CYP;UGT
1. Introducción...
Absoluta cuantificación de proteínas de las enzimas del citocromo P450 clínicamente relevantes y UDPglucuronosiltransferasas en masa proteómica e…
Revistas
Descargar PDF
Exportación
Libros
Carrito de compras
Search ScienceDirect
Busqueda avanzada
Journal of Pharmaceutical y Análisis
Biomédica
Volumen 100, noviembre de 2014, páginas 393 hasta 401Absoluta cuantificación de proteínas de las enzimas del
citocromo P450 clínicamente relevantes y UDP
glucuronosiltransferasas en masa proteómica específica
basada en la espectrometría
una,
una,
C. Groër 1,D. Busch 1,M. Patrzyk b,K. Beyer b,A. Busemann b,CD Heidecke
b,M. Drozdzik c,W. Siegmund una,S. Oswald una, ,
Artículos recomendados
Misa análisis proteómico basada en la e…
2013, Toxicología yFarmacología Aplicada
Más
Método de extracción de dispersión en f…
2014, Journal of Pharmaceutical y Análisis Bi…
Más
La cuantificación basada en MS LC-MS /…
2013, Journal of Pharmaceutical y Análisis Bi…
Más
Ver más artículos »
Mostrar más
doi: 10.1016 / j.jpba.2014.08.016
Ayuda
registrarse
Citando artículos (3)
Contenido del libro relacionados
Obtener los derechos ycontenidos
Destacados
• La cuantificación simultánea LCMSMS basado / de 13 enzimas que metabolizan
pertinentes.
• La validación del método integral para todas las enzimas antes mencionadas.
• Aplicación para cuantificar las enzimas en el hígado humano y microsomas
intestinales.
• Los primeros datos de proteínas sobre las enzimas que metabolizan intestinales
por proteómica dirigidos.
AbstractoCitocromo P450 (CYP) enzimas y UDPglucuronosiltransferasas (UGT) son factores
determinantes en la farmacocinética de la mayoría de los medicamentos en el mercado.
Para investigar su impacto en el metabolismo de fármacos intestinal y hepática, hemos
desarrollado y validado métodos de cuantificación de las nueve CYP (CYP1A2,
CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1, CYP3A4 y CYP3A5) ycuatro enzimas UGT (UGT1A1, UGT1A3, UGT2B7 y UGT2B15) que han demostrado
ser de relevancia clínica en el metabolismo de fármacos humano. La cuantificación de
proteínas fue realizada por la proteómica dirigidos utilizando cromatografía líquida con
espectrometría de masas en tándem (LCMS / MS) con base en la determinación depéptidos específicos de la enzima después de la digestión con tripsina utilizando en
cada caso de isótopos estables péptidos marcados como patrón interno. La
cromatografía de los respectivos péptidos se realizó con gradiente de elución usando
una fase inversa (C18) columna (Ascentis ® expreso Péptido ESC18, 100 mm x 2,1 mm,
2,7 micras) y ácido fórmico al 0,1% (FA), así como acetonitrilo con 0,1% FA como fasesmóviles, con un caudal de 300 l / min. La detección MS / MS de todos los péptidos se
llevó a cabo simultáneamente con un método de monitorización de reacción múltiple
programada (MRM) en el modo positivo mediante la supervisión en cada caso tres
transiciones de masa por péptido proteospecific y el patrón interno. Los ensayos fueron
validados según las directrices de bioanalíticos actuales con respecto a la especificidad,linealidad (0,25 a 50 nM), dentro de y entredíadía exactitud y precisión, eficiencia
digestión, así como la estabilidad. Finalmente, el método desarrollado se aplicó con
éxito para determinar la cantidad de proteína CYP y UGT en el hígado humano y
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0731708514004002
1/19
1/10/2015Absoluta cuantificación de proteínas de las enzimas del citocromo P450 clínicamente relevantes y UDPglucuronosiltransferasas en masa proteómica e…
microsomas intestinales. El método se demostró poseer suficiente especificidad,
sensibilidad, exactitud, precisión y estabilidad para cuantificar CYP humana
clínicamente relevante y enzimas UGT.
Gráficamente abstracto
Opciones Figura
Palabras clave
LCMS / MS;La cuantificación de proteínas;CYP;UGT
1. Introducción...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.