Absorbancia

Resultados.
Experimento 1:
Tabla1. Reconocimiento por Absorbancia de 280nm de luz ultravioleta.
Tubos
Contenido (3ml).
Absorvancia.
1
Plasma diluido 1:200.
0.464
2
SAB 3 mg/ml.
1.033
3
NaCL 0.9% p/v.
0.089




Observación: En el experimento de la absorbancia de 280 nm de luz ultravioleta al contenido que mas absorbe es el SAB 3 mg/ml y el de menos absorbancia es de NaCl 0.9%p/v.

Experimento 2:
Tabla 2. Reconocimiento por absorbancia a 540nm (reactivo de Biuret).
Tubos.
Concentración de proteínas.
Absorvancia inicial.
Absorvancia final.
1
0.846
0.330
0.198
2
0.150
0.175
0.043
3
0.375
0.210
0.078
4
0.750
0.327
0.195
5
1.125
0.411
0.279
6
1.500
0.454
0.322
7
0
0.132
0

Observación: En el experimento de reconocimiento porabsorbancia a 540 nm con reactivo de Biuret nos muestra la absorbancia inicial y la final, donde esta última se obtuvo restando la absorbancia inicial con el blanco (tubo 7), donde la absorbancia final es netamente la absorbancia de la concentración de proteínas.
También se observó que la concentración de proteínas es directamente proporcional a la absorbancia final.3
Imagen. Reconocimiento por absorbancia a 540nm con reactivo de Biuret

Observación: Se encuentran tubos rotulados del 1 al 7, la sustancia que se encuentra en ellos es de color violeta, pero está en distintos tonos según su concentración de proteínas siendo algunos mas claros y otros mas oscuros.


Grafico 1.Curva de Calibración. Concentración de proteínas por absorbancia a540 nm.

Observación: Mientras la concentración de proteínas aumenta la absorbancia a 540 nm aumenta con ella, lo que hace que sea una recta lineal.
También se presenta la ecuación de la recta que nos permite determinar concentraciones de proteínas.
Discusión.

Las proteínas son las biomoléculas más abundantes en todo el organismo y cumplen miles de funciones dentro de este,como: Trasporte, función osmótica,
4
capacidad amortiguadora o buffer, soporte mecánico y protección inmunológica. (3)
Existen diferentes métodos para la cuantificación y reconocimiento de proteínas, muchos de estos métodos se basan en la propiedad de las proteínas para absorber luz (280 o 540 nm de longitud de onda) y la capacidad de las proteínas paraunirse a algunos colorantes como el Biuret.
El reactivo de Biuret debido a un complejo de coordenadas entre los iones Cu+2 y los pares no compartidos del nitrógeno que forman parte de los enlaces peptídicos forman un compuesto de color violeta, por lo cual a mayor concentración de proteínas más intenso será el color violeta de la muestra, por esto podemos desprender que el Biuret reconoce dos omás enlaces peptídicos que pueden estar presentes en la solución identificando así la presencia de proteínas.
Comprobando las propiedades de las proteínas en el experimento uno reconocimos por absorbancia de 280 nm de luz ultravioleta, esta reconoce los aminoácidos aromáticos (triptófano, tirosina), esta longitud de onda la podemos aprovechar para reconocer las proteínas existentes en lasmuestras. En el experimento utilizamos en el tubo 1 Plasma diluido con NaCl 0.9% p/v (suero fisiológico), en el tubo 2 SAB 3 mg/ml (seroalbúmina de Bovino) y en el tubo 3 NaCl 0.9% p/v. Al ponerlo en el espectrofotómetro a 280nm de longitud de onda de luz ultravioleta el tubo 1 marco 0.464, el tubo 2 marco 1.033 y el tubo 3 marco 0.089, por lo que podemos desprender que a mayor absorbancia es mayor laconcentración de proteínas en la muestra, el tubo con mayor absorbancia fue el tubo 2 que contenía seroalbúmina( función osmótica y proteína transportadora) de Bovino que es netamente proteína proveniente del plasma sanguíneo, mientras que el tubo 1 que contiene plasma diluido en suero fisiológico fue el segundo con mayor absorbancia, ya que el plasma mas el suero fisiológico contenía más...