absorción de la Hemoglobina

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA N° 3
“Espectro de Absorción de la hemoglobina”
Título: “Espectro de Absorción de la hemoglobina”
Objetivos:
Obtener y analizar espectros de absorción de biomoléculas de la hemoglobina en un rango de luz visible.
Aplicar las técnicas de espectrofotometría para el estudio funcional de las biomoléculas.
Introducción:
El espectro electromagnético estácompuesto de frecuencias continuas de propiedades diferentes desde el punto de vista de su interacción con la materia. Las regiones más importantes del espectro, para la bioquímica, son el ultravioleta que se encuentra en el rango de 180-350 nm y el visible, entre 350-800 nm. De estas dos, la luz visible es de mayor uso, debido a que se encuentra relacionada con el reflejo de colores que el ojohumano es capaz de visualizar (13). Así tenemos que toda sustancia que absorbe luz visible aparece coloreada cuando transmite o refleja la luz que no absorbió.
El espectro UV-visible de una molécula, se obtienen midiendo la absorción de la luz de una muestra en función de la longitud de onda empleada. Resultando en un espectro de líneas característico para cada molécula, lo cual sirve paraidentificarlas, ya que la absorción de una longitud de onda depende de los grupos funcionales o el arreglo de átomos de la molécula per se. Así tenemos que el espectrofotómetro genera una luz de intensidad conocida que penetra en la solución y mide la intensidad de la luz que sale de ella al ser transmitida a una superficie metálica cubierta por óxido (1)
De esta manera, en la presente práctica serequiere comparar los espectros de la hemoglobina y algunos de sus derivados. Esperando obtener diferencias de estos debido a sus modificaciones estructurales.
Procedimiento:
Experimento 1:
Se midió la absorbancia a diferentes longitudes de ondas, entre 390nm y 360nm con intervalos de 10nm, de tres muestras que corresponden a hemina (ferriprotoporfirina IX), hemoglobina oxigenada y hemoglobinadesoxigenada, cada grupo de mesa trabajó con una muestra diferente. Para realizar las mediciones respectivas cada grupo de mesa preparó su muestra correspondiente en un ependor de la siguiente manera:
Grupo A: 20 μL de Hemina y 980 μL de agua destilada
Grupo B: 200 μL de lisado con Hb y 800 μL de agua destilada
Grupo C: 200 μL de lisado con Hb y 800 μL de agua destilada.

Así mismo se utilizó elblanco o la cubeta control para cada lectura y en ocasiones se refinó el barrido, sobre todo en regiones de mayor absorbancia (picos), mediante lecturas con intervalos de 5nm.

Experimento 2: Tabulación de datos para el espectro de absorción de la Hemoglobina.

a.- Se comparan los datos obtenidos de dos fuentes, para el mismo tipo de muestra, al realizar la gráfica de la absorbancia paracada longitud de onda a la cual fueron medidas cada muestra [La gráfica se presenta anexada].
Los datos a comparar pertenecen a los grupos de investigación de Scott Pralh y W. G. Zijlstra
b.- Se comparan los datos de absorbancia para cada longitud de onda de la Hb y la Hb O2 de adulto y feto, obtenidos por el grupo de investigación de W. G. Zijlstra.


Resultados:
Experimento 1:
La tabla 1presenta los resultados de absorbancia para cada longitud de onda entre 390nm y 630nm por grupo.

Absorbancia
 
Grupo A
Grupo B
Grupo C
λ (nm)
Mesa 1
Mesa 2
Mesa 3
390
0.385
0.284
0.285
400
 *
0.479
0.405
410
0.350
0.759
0.542
415
 *
0.800
0.581
420
0.206
0.705
0.566
425
 *
0.537
0.486
430
0.157
0.357
0.344
440
0.131
0.175
0.166
445
 *
0.131
0.135
4500.111
0.103
0.114
460
0.097
0.073
0.083
470
0.085
0.055
0.065
480
0.077
0.044
0.056
490
0.068
0.037
0.052
500
0.059
0.034
0.046
510
0.050
0.032
0.046
520
0.045
0.042
0.052
530
0.041
0.072
0.062
535
 *
0.088
0.065
540
0.038
0.093
0.067
545
 *
0.091
0.068
550
0.037
0.079
0.065
555
 *
0.064
0.062
560
0.039
0.058
0.058
565
 *
0.066
0.054...