acido citrico

Ácido Cítrico

BOEHRINGER MANNHEIM / R-BIOPHARM
Enzymatic BioAnalysis/Food Analysis

Método UV
Para la determinación de ácido cítrico en
alimentos y otros materiales

Para uso in vitro solamente

Cat. No. 10 139 076 035
Test-Combinado para 3 x 12 determinaciones
Principio (Ref. A1)
El ácido cítrico (citrato) es convertido a oxaloacetato en la reacción
catalizada por la enzimaCitrato Liasa (CL) (1).
oxaloacetato + acetato
(1)
Citrato
⎯ CL →
En presencia de la enzima L-malato deshidrogenasa (L-MDH) y de
L-lactado deshidrogenasa (L-LDH), el oxaloacetato y su producto de
decarboxilación, piruvato, se reducen a L-malato y L-lactato
respectivamente, por medio de nicotinamida-adenina dinucleótido
reducido (NADH) (2,3).
+

(2) Oxaloacetato + NADH + H ⎯ L-MDH →
+(3) Piruvato + NADH + H

⎯ L-LDH →

L-malato + NAD

L-lactato + NAD

+

+

La cantidad de NADH oxidado en las reacciones (2) y (3) es
estequiométrico con la cantidad de citrato El NADH se mide por
medio de su absorbancia a 334, 340 ó 365 nm.
El test combinado contiene
1 Tres Botellas 1: cada una con 1,4 g de liofilizado conteniendo:
Tampón glicil-glicina; pH 7.8, L-malatodeshidrogenasa, aprox. 136
U; L-lactato deshidrogenasa, aprox. 280 U; NADH, aprox. 12 U
2 Tres Botellas 2: cada una con 50 mg de citrato liasa liofilizada,
aprox. 12 U.
3 Botella 3: Solución estándar de ácido cítrico para control del
ensayo (la medición de la solución estándar no es necesaria para el
cálculo de los resultados). Usar la solución estándar sin diluir. (Fecha
de vencimiento: veretiqueta).
Preparación de las soluciones para 10 determinaciones
1. Disolver el contenido de una Botella 1 con 12 ml de agua
bidestilada.
2. Disolver el contenido de una Botella 2 con 0.3 ml de agua
bidestilada.
Estabilidad de los reactivos
Los contenidos de las Botellas 1 y 2 son estables a 2-8ºC (ver
etiqueta).
La solución 1 es estable por 2 semanas a 2-8ºC ó por 4 semanas a
–20 a -25ºC.Llevar la Solución 1 a 20-25ºC antes de su uso.
La solución 2 es estable por 1 semanas a 2-8ºC ó por 4 semanas a
–20 a -25ºC.
Procedimiento
1
Longitud de onda :
2
Cubeta de vidrio :
Temperatura:
Volumen final:
Leer contra aire
Soluc. de muestra:

340 nm, Hg 365 nm ó Hg 334 nm
1.00 cm de paso de luz
20-25ºC
3.020 ml
(sin cubeta en el paso de luz) ó contra agua
3
1-80 ug de ácidocítrico/ensayo (en 0.200-2.000
ml de volumen de muestra

1 La absorción máxima de NADH es a 340 nm. En espectrofotómetros las mediciones se
toman a la máxima absorción, si se utilizan fotómetros espectrales equipados con lámpara
de vapor de mercurio, las mediciones se toman a 365 nm ó 334 nm.
2 Si se desea se pueden utilizar cubetas descartables en lugar de cubetas de vidrio.
3 Ver lasinstrucciones para el rendimiento del ensayo.
4 La nicotinamida-adenina dinucleótido reducida, NADH-Na2, Cat. No. 127345, disponible
en Roche Applied Science.

Almacenar a 2-8° C

Esta traducción en español has sido realizada por R−Biopharm
Latinoamérica con el objeto de ayudar a los usuarios a entender el
procedimiento, pero no se actualizan regularmente por lo que no
pueden remplazar lasinstrucciones en inglés. Las instrucciones de
uso que son válidas, son aquellas incluidas en cada kit en Alemán y
en Inglés, dado que están escritas e impresas por el fabricante
(Roche). Refiérase siempre a las instrucciones incluidas en cada kit.

Pipetear en la cubeta
Solución 1

Blanco

Muestra

1,000 ml

1,000 ml

Solución de muestra*
0,200 ml
agua bidestilada
2,000 ml
1,800 mlMezclar**, leer las absorbancias de las soluciones (A1) luego de
aprox. 5 min e iniciar la reacción por la adición de:
Solución 2
0,020 ml
0,020 ml
Mezclar**, al finalizar la reacción (aprox. 5 min) leer las absorbancias
de las soluciones (A2).
*Enjuagar el tip de la pipeta con solución de muestra antes de dispensar la solución de
muestra.
** Por ejemplo, con una espátula plástica ó por...