Acidos nucleicos

ADN

Durante las dos últimas décadas muchas pruebas de naturaleza indirecta ha sugerido que los ácidos nucleicos puede ser el control de factores en la síntesis de proteínas.
Un número de trabajadores, especialmente Caspersson y Schultz, Brachet y Thorell, han mostrado que las altas concentraciones de ácido nucleico de ribosa se encuentran en tejidos embrionarios y neoplásicas. Aunque enmuchos casos no se hicieron mediciones directas sobre el importe de la síntesis de proteínas, se asumió de manera razonable que los tipos de tejidos utilizados fueron la síntesis de la proteína activa. Spiegelman y Kamen han planteado la objeción en cuanto a si la correlación entre la cantidad de ácido nucleico de ribosa y la síntesis de proteínas fue de valor real para determinar el efecto de losácidos nucleicos en la síntesis de proteínas. Señalaron que igualmente buenas correlaciones se pueden obtener entre la síntesis de proteínas y otras fracciones de fosfato. Thorell, usando tejido de la médula ósea, se atribuyó la evidencia de la existencia de distintas fases en la formación de proteína en los glóbulos rojos, con los cambios de correlación en el ácido nucleico de ribosa.
Se hademostrado que por Borsook reticulocitos, pero no eritrocitos, rápidamente incorporar aminoácidos radiactivos. Esto sugirió la posibilidad de medir simultáneamente la incorporación de aminoácidos y el contenido de ácido nucleico en un sistema en el que tanto se puede esperar que sea en plena evolución.
Metodo
La producción de conejos se vio estimulada por inyecciones subcutáneas diarias de ml. de un 2,5por ciento de solución de clorhidrato de fenilhidrazina de timbre es la solución neutralizada a pH 7.0 (7). Esta sustancia lleva a la destrucción de eritrocitos maduros, dando como resultado aumento de la actividad hematopoyética y la liberación de reticulocitos en la sangre. Las inyecciones de 0,05 mg. de ácido fólico más 0,05 de vitamina B 12 se hicieron al mismo tiempo para estimular laeritropoyesis en la médula ósea. Extracción de muestras de sangre del RABIT fue un factor adicional en la promoción de la producción de reticulocitos.
15 ml. de sangre fueron retirados de la vena marginal de la oreja al inicio del experimento y el segundo, cuarto y séptimo día. Las alícuotas de esta muestra se utilizaron para la determinación del contenido de ácido nucleico, el número de reticulocitos,el volumen de glóbulos rojos hematocrito, y la absorción de la leucina radiactivos. La leucina marcada con C14 en el carbono carboxilo, y su actividad específica fue 15,500 cpm / mg.
El método desarrollado por Boorsook para la incorporación de aminoácidos en la sangre fue aplicada a la leucina radiactivos. Esta consiste fundamentalmente en 3.8ml de incubación. de sangre con 0,2 ml. solución deleucina radiactiva en el aparato Dubnoff (8) durante 1 hora a 37,5 ° en un ambiente de 95 por ciento de oxígeno y dióxido de carbono 5 por ciento. Al final del periodo de incubación, la mezcla de reacción se enfría a 0 ° y se centrifuga y el sobrenadante eliminado. Las células son luego recogidas en 15 ml. solución de Krebs-Henseleit (9) y se centrifuga y se desecha el sobrenadante. Esteprocedimiento se repite dos veces y la masa resultante de células lisadas lavado 80 ml. de agua. La proteína se precipita de este líquido mediante adición de ácido tricloroacético para hacer la concentración final del 7 por ciento. Después de permanecer por 1 o más días, el precipitado se lava diez veces con 20 ml. porciones de frío 7 por ciento de ácido tricloroacético, seguido de dos lavados con 20 ml. deacetona y dos lavados con 20 ml.
El precipitado se seca en estufa a 80 ° durante la noche y la tierra a un polvo y la radiactividad de 20 mg. porciones determinadas con un contador Geiger-Muller. Las mediciones de radiactividad son expresados como cuentas por minuto por mg. Las correcciones se hicieron para el espesor de la muestra como se describe por Kamen
El ácido nucleico fueron...